化妆品功效评价(Ⅳ)——延缓皮肤衰老功效宣称的科学支持

李诚桐;赵华

【摘 要】概述了皮肤的衰老表现和衰老机制学说,介绍了生物化学法、细胞生物学法、三维重组皮肤模型替代法、动物实验法、主观评估、客观仪器评价法等延缓皮肤衰老化妆品功效评价方法,提供了延缓皮肤衰老功效评价的新思路,展望了延缓衰老化妆品功效评价方法的未来发展方向.

【期刊名称】《日用化学工业》

【年(卷),期】2018(048)004

【总页数】8页(P188-195)

【关键词】延缓皮肤衰老化妆品;皮肤衰老;功效评价

【作 者】李诚桐;赵华

【作者单位】北京工商大学理学院化妆品系,北京100048;北京市植物资源研究开发重点实验室,北京100048;北京工商大学理学院化妆品系,北京100048;北京市植物资源研究开发重点实验室,北京100048

【正文语种】中 文

【中图分类】TQ658

伴随着人们对精神生活的追求不断提高，消费者更加注重皮肤的保养，并希望通过使用化妆品来延缓皮肤衰老。市场的需求促使化妆品企业相继推出多种延缓皮肤衰老宣称的产品，而产品是否能够达到宣称目的，以及如何对延缓皮肤衰老宣称提供科学支持，也成为生产企业、消费群体以及市场监管部门所共同关注的话题。

1 皮肤的衰老

人的一生中要经历生长期、成熟期和老年期(衰老期)3个阶段。衰老是一个复杂的、涉及多种不同器官和系统的系列变化过程，是生命的基本特征之一，它是生物个体在生命周期中必然发生的、难以逆转的退行性变化。在人体衰老阶段，各器官、组织和系统都会发生变化，但从外观上最容易观察到的是皮肤及其附属器官的变化[1]。

皮肤覆盖在身体表面，由表皮、真皮、皮下组织构成，呈多层次分布。皮肤的衰老是一个多维立体的过程[2]。皮肤老化在表皮、真皮、皮下组织和附属器官的主要表现有以下几个方面。

1)表皮。表皮老化主要表现为皮肤变薄，角质形成细胞增大且部分角化不全，其中比较明显的指标为皮肤水分含量的丢失。由于水合能力降低，皮肤组织细胞的水分减少，细胞皱缩，出现细小皱纹。

2)真皮。真皮老化主要表现为成纤维细胞减少、体积变小、排列不规则，细胞外基质

中胶原纤维、弹性纤维及其他成分减少和变性。

皮肤中水分的保持与真皮的基质黏多糖和蛋白质的糖蛋白复合物有密切关系。除此之外，还涉及到真皮层的纤维网状结构，其中胶原纤维是皮肤组织真皮层的主要成分，在维持皮肤组织韧性和弹性方面起主要作用。随着年龄的增加，皮肤中可溶性胶原纤维减少，不溶性胶原纤维增加，皮肤的伸展度也随之减小，这也是老化皮肤的特征之一。

3)皮肤附属器官。皮肤附属器官主要有外分泌汗腺、皮脂腺和毛发。老化皮肤中外分泌腺的数量与活性均会下降，分泌细胞中脂褐素逐渐增多，表现为皮肤干枯、暗黄。皮脂腺分泌的皮脂在青春期达到高峰，进入成年期后相对稳定，之后随着年龄的增长会逐渐降低。头发苍白也是判断衰老的重要标志，与此同时，毛囊的数量减少、体积变小，毛发生长缓慢且逐渐变细。

4)皮下组织。老年人由于激素分泌变化，脂肪组织减少、变性，导致真皮网状层下部缺乏支撑，这也是造成皮肤松弛的重要原因。

皮肤衰老是各种因素共同作用的结果。皮肤衰老分为2种：一种是固有的老化，又称为自然老化或者内源性老化，是由于遗传因素和不可抗因素(机体内分泌及免疫功能随着机体衰老所发生的改变)所引起的；另一种是由于环境因素如紫外线、吸烟、风吹、接触化学物等引起的外源性老化，其中日光中的紫外线长期反复照射是环境中影响皮肤老化的最重要因素，又称为光老化[3]。在内源性因素方面，学者对皮肤衰老提出了一些学说，例如自由基学说、衰老基因学说、线粒体DNA损伤积累学说等，各学说都有一定的依据[4]。

自由基学说由Harmam在1956年提出[5]，该学说认为自由基是普遍存在于生命有机体中、具有高度化学活性的中间体；在正常生理条件下，机体内自由基的产生与消除处于动态平衡，一旦这种平衡被破坏则会导致过量自由基的产生；过量的自由基对染色体、线粒体、细胞膜和结缔组织等生物组织的毒害性攻击会引起机体的衰老。自由基引起机体衰老的机制可以概括为以下3个方面：一是使生物大分子交联聚合和脂褐素堆积；二是使器官组织细胞受到破坏并减少；三是使免疫功能降低[6]。

非酶糖基化衰老学说认为，糖基化造成的蛋白质的交联损伤是衰老的主要原因，由此造成各种蛋白的交联变性，抗氧化酶和DNA修复酶等功能的损伤，还会造成能量供应的减少，代谢功能的降低、失调等老化过程。研究表明产生的高级糖基化终产物不仅会直接影响细胞和组织功能，参与疾病的产生，还会通过与特异受体结合来改变蛋白质和细胞功能，导致机体的病理变化[7]。非酶糖基化是造成糖尿病并发症、阿尔兹海默病等退行性疾病的主要原因。氨基胍等药物已经用于糖尿病等疾病的临床治疗，在延缓皮肤衰老方面，通过抑制糖基化终产物的活性，进而延缓皮肤衰老，也成为一个重要的研究方向。Kristal和Yu研究认为，非酶糖基化衰老学说与自由基学说既相互独立，又相互联系、相互补充，并在1992年把自由基氧化和非酶糖基化有机结合起来[8]。

遗传基因学说主要从染色体及基因水平分析衰老现象，认为衰老是由某种遗传程序确定并按时表达出来的生命现象。随着年龄的增长，修饰基因丧失、DNA甲基化减少、磷酸化反应降低、端粒缩短、DNA自我修复能力下降、原癌基因和抑癌基因等调控异常导致染色体突变、正常细胞过度分化，从而导致出现衰老表现[9]。

线粒体DNA损伤学说由Mique和Cowiker在1980年提出[10]，近年来对它的研

究成为国际上研究衰老机理的热点。该学说认为线粒体DNA的损伤是细胞衰老和死亡的分子基础。从细胞生物学角度讲，细胞内氧化磷酸化产生的能量有90%来自线粒体，以供细胞生命之需，当发生线粒体DNA损伤时，产生的能量减少，影响细胞的能量供给，导致细胞、组织、器官功能的衰退。因此研究人员认为，线粒体的变性、渗漏和破裂都是其衰老的重要原因。延缓线粒体的破坏过程，可能会延长细胞寿命，进而延长机体的寿命。

其他衰老学说还包括：酶类活性变化学说、免疫学说、激素学说、端粒学说、必需微量元素的缺失学说等，都从不同角度和水平对衰老的机制做出了推测。

延缓皮肤衰老功效的化妆品不仅是基于衰老学说的理论，更多的是基于局部衰老体征的针对措施[11]。按不同作用机制一般可将延缓衰老的活性原料分为保湿、清除自由基、吸收紫外线以及细胞修复4种类型。多数的延缓皮肤衰老的化妆品会通过其中一类或几类活性物质来达到功效作用。另外，值得一提的是，化妆品功效的发挥与两方面因素有关：一是活性成分自身具有功效；二是该活性成分需以一定浓度有效地被传送至作用位点[12]。

能够为延缓皮肤衰老功效宣称提供科学支持的评价方法可分为体外法和在体法。

2 体外法

体外法包括生物化学法、细胞生物学法和三维重组皮肤模型替代法等。

2.1 生物化学法

生物化学法主要通过评估功效物质对自由基的清除率，对金属蛋白酶和弹性蛋白酶的

抑制率，对非酶糖基化终产物生成的抑制情况等来表征其延缓衰老的功效。生物化学法的特点是操作简单，成本低，易于实现，速度快，可以用于延缓皮肤衰老原料的高通量筛选，能够为化妆品延缓皮肤衰老的宣称提供科学支持。但由于条件局限性，此方法不能全面地反应评估体系的作用机理，从而在应用中会受到一定限制[13]。

根据自由基学说理论，自由基过量产生是导致皮肤自然衰老和光老化的主要原因。因此，是否具有清除自由基的能力是评价延缓衰老化妆品(原料)的重要指标之一。目前评价清除自由基能力的指标主要有：清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH)能力、清除超氧阴离子能力、清除羟自由基能力、清除ABTS+自由基能力，以及氧自由基吸附能力(ORAC)指标等[14，15]。信璨和王振宇等人[16，17]分别测定了黑豆水提取物和蓝靛果乙醇洗脱物对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除能力，证实黑豆水提取物和蓝靛果乙醇洗脱物具有很好的清除自由基的能力，可以应用于化妆品中。

抑制基质金属蛋白酶法。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类生物活性依赖于锌离子、有降解细胞外基质能力的内肽酶家族[18]。MMPs分泌增加会加速胶原蛋白的降解，造成皮肤胶原蛋白流失，皮肤松弛，弹性下降，细纹增多且不断加深。因此可以通过抑制金属蛋白酶的能力大小评价化妆品的抗皱功效。抑制基质金属蛋白酶的实验方法包括荧光底物法、酶联免疫测定法、明胶酶谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等[19]。目前用于化妆品功效研究主要是荧光底物法，通过荧光强度变化的大小来反应基质金属蛋白酶抑制率大小[20]。来吉祥[21]用活化的40μL MMP-1溶液(100 μL溶液含0.20 μg MMP-1)、8 μL抑制剂和52 μL荧光底物DQ-gelatin溶液(100 μL溶液含0.20 μg DQ-gelatin)混合，37 ℃恒温反应600 s后，在激发波长460 nm，发射波长520 nm条件下检测反应体系的荧光强度。结果发现茶多酚、大黄提取物、马齿苋提取物和丁香酚等4种植物成分对

MMP-1抑制率较高。王艳春等[22]将基质金属蛋白酶1 μL和不同浓度的覆盆子提取物1 μL加入缓冲溶液中，对照组不加入覆盆子水提物溶液，用荧光酶标仪检测荧光强度，计算出不同浓度覆盆子提取物对MMP-13的抑制率，发现覆盆子水提物对MMP-13有抑制作用。

抑制弹性蛋白酶法。弹性蛋白酶作为具有极高选择性和专一性的蛋白分解酶，对许多氨基酸如甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸等含羧基的多肽键具有催化水解的作用，可以使结缔组织蛋白质中的弹性蛋白分解[23]。弹性蛋白酶抑制剂能够有效抑制弹性蛋白酶活性，减慢弹性蛋白的降解速度，起到延缓衰老、减少皱纹的作用。抑制弹性蛋白酶的实验原理是猪胰腺弹性蛋白酶(PPE) Ⅳ型与底物n-succ-(Ala)3-Pnitroanilide (SANA)发生催化反应，添加活性物质后吸光度发生变化，通过吸光度变化的大小反映弹性蛋白酶抑制剂抑制率大小，从而对弹性蛋白酶抑制剂进行筛选[24]。Kim等[25]取200 μL 0.12×10-6 mol/L Tris-Cl缓冲液配制成1×10-3 mol/L SANA，然后加入20 μL样品和20 μL猪胰弹性蛋白酶，于25 ℃条件下孵育10 min后，在410 nm下测定吸光度。研究发现莲的叶、种子和花提取物的弹性蛋白酶抑制率在50%左右，推测可能是提取物中的生物碱发挥了作用。

抑制蛋白质非酶糖基化终末产物生成法。非酶糖化反应是蛋白质和葡萄糖在体内发生酶促反应形成Schiff碱和Amadori产物等早期产物，进而经过氧化、重排、交联等过程，形成不可逆的非酶糖基化终末产物的一系列复杂反应。糖基化的蛋白质会产生荧光，通过测定荧光产物的变化表示提取物的抑制情况。陈绍红等[26]以pH=7.2的磷酸缓冲液分别配制含5.0 g/L牛血清白蛋白、3 mmol/L叠氮钠及1 mol/L葡萄糖的液体。药物干预组于糖基化反应体系中加入氨基胍或苦瓜提取物。得出各质量浓度的苦瓜提取物处理组均有

抑制蛋白质非酶糖基化的作用，且呈浓度-抑制作用正相关关系，其中1.0 g/L苦瓜提取物组完全抑制了体外蛋白质非酶糖基化的发生。

2.2 细胞生物学法

细胞生物学法是通过建立细胞模型，模拟人体生理环境培养细胞的方法。一般是将功效添加剂溶于水或有机溶剂后用于培养细胞，通过观察样品对细胞增殖分化能力的影响，以及测试相关指标的变化等，来表征该物质延缓皮肤衰老的能力。

细胞生物学法具有培养环境容易控制、细胞特征容易均一和易于规模化、机械化操作的特点[27]。相比于生物化学实验，更接近于生物体，可用于毒性分析和功效测试，是保证化妆品安全功效的重要手段，能够为化妆品延缓皮肤衰老的宣称提供科学支持。目前细胞培养技术从单一细胞培养向细胞共培养和3D皮肤模型推进，对于原料及化妆品的评价更加直观。但也存在着多细胞共培养技术不成熟、无法达到毒理评估标准、组织结构较简单、各细胞层分化不良以及某些标志物不规则表达的缺点。

延缓皮肤衰老的细胞生物学法常用人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞。

表皮细胞活力会影响皮肤保湿功能，角质层的含水量低于10%，皮肤就会粗糙、干燥，进而引起皱纹[28]。角质形成细胞是表皮中的主体细胞，从婴幼儿或者成人皮肤中原代分离培养人表皮角质形成细胞，经多种特征蛋白表达等鉴定后，即可传代备用[29]。目前人皮肤永生化角质细胞HaCaT细胞株已被广泛应用于化妆品的抗衰老及透皮性的研究中。角质形成细胞合成的与表皮保湿相关的生物分子主要有水通道蛋白(AQP)、紧密连接

蛋白(TJP)和透明质酸(HA)等，细胞生物学法的评价主要针对以上3种保湿功效相关的物质进行检测。目前主要采用Western Blot杂交、免疫组化染色法半定量检测以及商品化试剂盒ELISA法定量检测AQP3和TJP含量的变化。HA的检测方法有多种，但采用商品化试剂盒ELISA法或免疫化学发光法定量检测HA更精确，也更适用于化妆品评价[30]。

真皮中成纤维细胞的活力会影响胶原蛋白的分泌、胶原蛋白纤维的数量和质量，成纤维细胞受损会导致胶原蛋白的降解与合成失调、胶原纤维构造紊乱[31]，导致皮肤失去弹性并形成皱纹。皮肤的老化研究中，成纤维细胞体外培养技术已经成为研究皮肤老化的重要工具，实验时使用的成纤维细胞可以是正常细胞，也可以是经紫外线或者H2O2损伤的细胞，在一定浓度的功效物质存在的条件下培养一段时间，通过MTT法对成纤维细胞的体外增殖能力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等进行检测，通过ELISA法测定丙二醛(MDA)和透明质酸的含量变化，通过流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平，通过ELISA和Western Blot杂交检测胶原含量的变化[32-34]。RTCA细胞实时分析技术，利用细胞贴壁生长造成阻抗改变达到实时动态反映细胞生长信息的目的，其操作简单无需进行细胞标记及固定，且成本较低，是近年来出现的细胞电子传感新技术[35]。Chiang等[36]使用302 nm、40 mJ/cm2的UVB照射人皮肤成纤维细胞15 s后，添加勾藤水提物培养一段时间进行MMT实验、抑制基质金属蛋白酶(MMP)和总胶原蛋白含量测定。实验发现勾藤水提物能降低MMP-1，MMP-3和MMP-9的表达，促进胶原蛋白的生成。Choi等[37]将人成纤维细胞经312 nm，25或52 mJ/cm2的UVB辐照后，添加L.榆提取物培养一定时间，进行抑制MMP实验和总胶原蛋白含量测定。发现L.榆提取物能下调人成纤维细胞MMP-1的表达，促进胶原蛋白的合成。

细胞共培养皮肤替代物是一种较新的体外培养皮肤模型，弥补了单独培养仅有一种细

胞未考虑体内其他细胞对其产生作用的不足。细胞共培养采用同一人体细胞来源，在统一的生长环境下批量生产，其模型的形态结构特征、对外界物质的屏障功能更加接近人类在体皮肤，并且消除了物种间皮肤结构差异的影响，为功效物质的筛选提供更有效的方法[38，39]。

2.3 三维重组皮肤模型替代法

在欧美等国家都鼓励采用动物替代方法、欧盟已下令全面禁止通过动物实验进行化妆品研究等法规的限制下，皮肤模型成为一种备受关注的替代法。三维重组皮肤模型在基因表达、组织结构、代谢活力等方面均高度模拟人体皮肤，已经广泛应用于化妆品安全性评价，在化妆品功效和大气污染防护领域也有相关研究[40-42]。

皮肤模型按照复杂程度分为上表皮模型、真皮模型和全层模型3种，全层模型主要由表皮层、真皮层和细胞外基质层(含胶原纤维)构成。

实验时将人造皮肤模型在功效物质存在的条件下培养，或者将功效物质配方后涂抹于人造皮肤模型上，通过测试细胞活力和细胞抗氧化等指标来评价延缓皮肤衰老的功效。步犁[43]对皮肤模型EpiskinTM (中国制造)进行研究，在37 ℃条件下，每孔加入2 mL PBS，将皮肤模型转移至此，辐照设置6个剂量，辐照完成后，将皮肤模型移回装有培养基的12孔板中孵育24 h，通过MMT实验测细胞的存活率，结果发现细胞的存活率与辐照量存在明显的剂量关系。Grazul-Bilska等[44]将保湿面霜涂于Epi Derm模型上，其总抗氧化能力明显增强。Santa-Maria等[45]用皮肤模型进行原料测试，结果显示米糠中水溶性酶类具有降低脂质过氧化值的作用。

皮肤模型高度模拟人体在体皮肤的特点，为延缓皮肤衰老的功效研究提供了科学支持，但由于模型缺少毛囊、皮脂腺等皮肤附属器官，与真实皮肤仍有一定差距。

3 在体法

在体法可以分为动物实验法和人体试验法。化妆品通过安全性测试后可进行人体测试，试验一般以人体面部、手臂内侧等作为受试区域。人体试验法包括主观评估和客观仪器评价法。

3.1 动物实验法

常用于制备皮肤衰老模型的动物有犬、小鼠、大鼠和沙鼠等，此外还有果蝇、小型鱼类和线虫等。不同动物模型的特点不同，其中以大鼠和小鼠最为常用。动物衰老模型的观测指标由表观指标、病理指标和生化指标组成[46]。

衰老小鼠模型主要是通过注射D-半乳糖或者紫外线照射使特定鼠种皮肤老化产生衰老变化，给药一定时间后，用取血测定、细胞方法、皮肤观察法等进行定量分析。利用小鼠动物模型还可研究特定化合物对小鼠生长性能、抗氧化及免疫功能的影响。王灿等[47]通过小鼠的动物实验方法在末次给药1 h后，眼眶采血测SOD，MDA，CAT和GSH-Px等含量，并取脱毛后皮肤组织0.5 g，进行称重测量含水率，最终得出桑叶黄酮具有一定的抗衰老作用。Gao等[48]通过对小鼠连续14 d灌胃黄芪提取物，称量小鼠的体重变化，测定肝脏SOD，CAT，GSH-Px活性和MDA浓度，测定小鼠淋巴细胞增殖活性。结果显示以活性成分黄芪多糖为主的黄芪提取物能显著增加小鼠体重和免疫器官总重量，提高机

体免疫功能和抗氧化机能。

动物实验法中所存在的动物与人之间的物种差异，以及实验动物的痛苦和所带来的伦理学讨论等问题，不断被学者和相关机构组织置疑反对。当下，“3R”(减少、优化、替代)原则不断深入，取消动物实验已经成为一种趋势，2013年，继欧盟下令全面禁止化妆品研究使用动物实验后，日本的资生堂也已经宣布全面取消动物实验。目前，是否将动物实验继续用于化妆品功效评价有待深入探讨[49]。

3.2 主观评估

主观评估由研究人员的视觉评估和受试者的自我评估组成。

视觉评估是由研究人员根据已定的评分标准对样品的使用效果进行打分，常用于肤色、皱纹改善效果等评价，属于半定量评分方法。该评估方法简单，容易操作，不需要复杂设备，结果具有一定的可重复性，但需熟练的评分人员[50]。如皮肤皱纹的评价中，首先要对皮肤皱纹的轻重程度制定统一的分级评分标准，研究人员根据该标准直接对使用产品前后的受试者皱纹或皱纹照片进行等级评分[51]。长期以来，学者们采用了不同的研究方法，对皱纹进行了不同标准的分级。例如：Weiss等[52]对光老化皱纹分级，将描述性分级与照片举例相结合分为轻中重三级；Lemperle将面部皱纹分为0～5级：并以面部示意图的方式规定了评价面部皱纹12个参考部位，每个部位的每一级都附有照片示例；日本学者通过测试和分析发布一种将眼角皱纹分为9个等级的分级标准[53]；一些大型的化妆品公司(如欧莱雅)在评价化妆品祛皱功效时，也设立了内部的皱纹分级标准。

受试者自我评估是通过让受试者填写问卷等方式评估化妆品的使用效果，该方法要求问卷内容设计合理、问卷数据真实可靠、实验样本数量充足。在高雅倩等人[54]的研究过程中，让受试者分别在第2和4周随访时完成自我评价问卷，根据个人主观感受对产品功效进行评价。得到同时使用肌底液产品和抗衰老面霜比单独使用抗衰老面霜具有更好的效果。区梓聪[49]在测定产品的人体功效性评价时，分别从皮肤松弛、皮肤弹性、皱纹、肌肤白度、色斑6个项目，使受试者对使用前后皮肤的状态进行评价(有效、较有效、效果一般、基本无效)，并收集数据，计算出受试者主观评价的有效率。

3.3 客观仪器评价法

人体在体测试时采取双盲试验的方法，受试者持续使用样品一段时间后，定量测试受试区域各指标的变化，通过一种或多种指标的改善量，综合评价化妆品延缓皮肤衰老的效果。此方法中，受试者的选用得当和评价指标的合理性是关键所在。

皮肤衰老外观上以色素失调、表面粗糙、皱纹形成和皮肤松弛为特征，通过比较抗衰老化妆品使用前后对皮肤衰老各方面的特征的影响，可以比较客观地评价抗衰老化妆品的功效[55]。

保湿是抗衰老中必不可少的一个环节。随着皮肤的逐渐老化，皮肤角质层的保水能力逐渐变弱，皮肤变得越来越干燥。皮肤的水分含量降低将会引起蛋白酶活性降低，从而引发蜕皮等现象。保湿实验主要是进行皮肤水分含量(MMV)测试和经皮皮肤水分散失(TEWL)测试[28]，通过对使用产品前后角质层含水量的变化情况和皮肤屏障功能的好坏来评价化妆品的人体皮肤保湿功能。皮肤干燥会引起皮肤皱纹[56]，角质层的含水量处于

10%～30%之间的是健康皮肤，低于10%，皮肤就会粗糙，进而变得容易出现细纹。保湿实验简单易于操作，但是需要结合其他功效评价方法同时使用。

弹性测定实验主要包括吸力法、扭力法和测量弹性切力波传播速度法。测试时常用的方法是基于吸力和拉伸原理设计的吸力法，通过皮肤拉伸长度和时间的关系曲线得到皮肤的弹性参数，该方法简便迅速，测量不受皮肤厚度影响，对于研究皮肤老化来说是一个较好的指标，缺点是测试部位较有局限，并且无法对较硬皮肤完成测量[57]。皮肤弹性测量使用Cutometer (MPA580，2 mm探头，Courage+Khazaka公司，德国)，选取最接近皮肤弹力真实状态的参数R2值来进行评估。R2值是无负压力时皮肤的回弹量Ua与有负压力时的最大拉伸量Uf之比，测量3次取平均值[49]。赵乐荣等[58]制备了含青梅花提取物的护肤霜，由30名志愿者连续使用4周，通过对皮肤粗糙度和皮肤弹性的测量得出，含青梅花提取物护肤霜能使皮肤粗糙度降低，皱纹深度变浅，皮肤弹性增强。

皮肤色度测试。采用色度系统(Lab色度系统)，颜色仪测得的L值表征亮度，其变化表示皮肤黑白色度的变化，其值越大，颜色越偏向白色；a值代表红绿色度，其变化表示产品使用前后红绿色度的变化；b值代表蓝黄色度，其变化表示产品使用前后皮肤蓝黄色度的变化。由测得的L，a和b数值可以计算ITA°值比较人群皮肤颜色的变化，ITA°值越大，皮肤越明亮，反之，皮肤越晦暗。

皮肤黑色素含量MI值。MI值表征黑素指数，MI值越大皮肤黑色素含量越高。吴金昊等[59]通过测试志愿者使用某美白祛斑产品前后的MI值，在实验周期第0～7周的时间范围内，皮肤黑色素含量MI值呈降低趋势，且在实验第4和7周时，样品组均有显著性差异(P<0.05)，得出此化妆品具有美白皮肤的效果。

皮肤油脂随着老化带来的激素分泌和代谢改变，皮脂腺分泌油脂含量下降，导致皮肤干燥粗糙、无光泽。因此通过对皮肤表面皮脂的测定可作为功效评价的一个指标。测量采用皮肤油脂测定仪，每次测量前进行一次标定后，将探头垂直压在受试区域，一定时间后再将探头压回进行读数。

轮廓仪测量方法主要包括机械性皮肤轮廓测量法、光学皮肤轮廓测量法、激光皮肤轮廓测量法和透视皮肤轮廓测量法，是一种间接测量方法[60-63]。所谓间接测量方法，主要是因为需要制备皮肤表面硅胶复制模型，而硅胶模型的制作过程比较复杂，容易造成复制模型与皮肤软组织的不一致，模型中的气泡对结果影响也很大，所以对操作人员有较高的技术要求。使用CCD摄像机摄取皮肤使用化妆品前后的硅胶复制模型图像，再用计算机对图像进行处理，取得皮肤皱纹的相关参数，实现皱纹的定量研究。

干涉条纹光投影技术。测量时光线发射到皮肤表面后，用特殊相机记录图像。经解析处理产生三维图像重建皮肤表面纹理。可以对皮肤硅模进行扫描，也可以直接对活体皮肤进行扫描，受检皮肤面积更大，能对深皱纹扫描，扫描速度更快，但扫描的图像不如机械轮廓仪清晰[64]。

VISIOD-3D快速成像法。基于Derma TOP皮肤快速成像分析系统，采用条纹投影测量技术，通过头部和2个耳部传感器一次定位、面部激光二次定位[65]、照相机摄取图像、三维皮肤快速成像和计算机处理图像得到皮肤纹理度、皱纹等参数。整个系统快速、稳定、精确、可靠。测试时选择相对稳定的环境、符合条件的受试者以及合适的测试部位，受试者使用化妆品前后进行快速成像，计算机处理得到数据后，进行数据统计，得出相关结论。皮肤纹理度的变化通过皮肤平均粗糙度Rz、皮肤平均深度Rp、算术平均粗糙度

Ra进行直接量化。Jegasothy等[66]使用Derma TOP对33名平均年龄45.2岁的女性使用样品后，进行为期8周的研究，结果发现，这种新的纳米透明质酸的皱纹深度降低率可达40%，表明这种纳米透明质酸是一种很好的抗皱原料。Paes等[67]使用Derma TOP研究男人和女人的口周皱纹差异，发现女性比男性有更多和更深的皱纹。Lagarde等[68]使用DermaTOP研究发现人体皱纹随年龄增加，暴露于日光下的部位会更明显。

VISIA-CR专业皮肤分析方法测量时受试者的头部固定在支撑处，运用1 200万像素相机和普通荧光、UV光和偏振光3种光源对面部进行拍照，摄取图像后，利用Image-pro等软件对图像进行处理，获得皮肤皱纹数量、形状大小以及皮肤平滑度等数据[69]。VISIA-CR专业皮肤分析系统是目前较方便的皮肤图像分析方法，相比其他方法，摄取的图像更加清晰，分析结果更加准确和客观[50]。Dicanio等[69]使用VISIR测出参数，运用面部皮肤参数的线性组合来计算表观年龄，进而预测化妆品功效。另外，VISIR-CR用于激光嫩肤的研究也较多。

人体试验模型一直被认为是最佳受试环境，但在测试期间难免会受到其他情况的干扰，不能保证受试结果的绝对客观性。因此可以采用在体法和体外法相结合的方式，各方法互相补充，以得到综合性的评价结果[70]。

4 结束语

随着科学技术的发展，延缓衰老化妆品的评价方法也不断推陈出新，总体趋势是直接测量法逐渐取代了模型间接测量法，动物实验部分逐渐用其他方法替代，评价方法向着更简单、客观、直观、全面，易于操作的方向发展。将生物技术和现代仪器相结合，人体试

用试验和现代仪器相结合，在统一的评价标准条件下，建立多层面的功效评价体系，符合现阶段中国化妆品行业发展需求，也是未来化妆品功效评价发展的趋势。

化妆品作用机理复杂、评价方法多样，完善现有的功效评价方法以及开发新型评价方法将是未来延缓衰老化妆品领域中的一个重要任务。目前，欧盟、韩国和日本等组织和国家已经建立了抗皱化妆品功效评价指南，或推出了功效原料清单。近年来，我国正加紧完善相关方面的法律法规，通过更加规范的评价方法，使消费者可以选用更适合的化妆品，提高企业对延缓衰老化妆品的研发水平，促使我国化妆品市场向着公平和健康的方向发展。

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