(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 109069447 A(43)申请公布日 2018.12.21
(21)申请号 201780028370.8(22)申请日 2017.03.08
(30)优先权数据
PCT/NL2016/050160 2016.03.08 NL(85)PCT国际申请进入国家阶段日
2018.11.07(86)PCT国际申请的申请数据
PCT/NL2017/050141 2017.03.08(87)PCT国际申请的公布数据
WO2017/155396 EN 2017.09.14(71)申请人 N·V·努特里奇亚
地址 荷兰祖特梅尔(72)发明人 M·C·德维尔德
权利要求书1页 说明书11页 附图6页
(74)专利代理机构 北京北翔知识产权代理有限
公司 11285
代理人 侯婧 张广育(51)Int.Cl.
A61K 31/04(2006.01)A61K 31/202(2006.01)A61K 31/375(2006.01)A61K 31/7068(2006.01)A61K 31/7072(2006.01)A61P 25/28(2006.01)
(54)发明名称
治疗脑萎缩的方法(57)摘要
本发明涉及治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，和
DHA)、二十(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22:6；
碳五烯酸(20:5；EPA)和二十二碳五烯酸(22:5；DPA)或其酯，以及(iii)维生素C和/或硒，并任选地与维生素E结合，在制备用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩的产品中的用途。
CN 109069447 ACN 109069447 A
权 利 要 求 书
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1.治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22：6；DHA)、二十碳五烯酸(20：5；EPA)和二十二碳五烯酸(22：5；DPA)或其酯，以及(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合，在制备用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩的产品中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中需要治疗上防治和/或减缓脑萎缩的受试者患有神经变性疾病或有增加的患神经变性疾病的风险。
3.根据权利要求1和2的用途，其中受试者患有阿尔茨海默病或有患阿尔茨海默病的风险。
4.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述产品包含治疗量的维生素B6和/或维生素B12，包括其功能等同物。
5.根据前述权利要求中任一项的用途，其中DHA以每100g产品或每天至少0.5g、优选0.5-5g的量给药。
6.根据前述权利要求中任一项的用途，其中尿苷，作为尿苷、脱氧尿苷、尿苷磷酸盐、核碱基尿嘧啶和酰化尿苷衍生物的累积量，以每100g产品或每天0.1-5g、优选0.2-2.5g、更优选0.25-1g的量给药。
7.根据前述权利要求中任一项的用途，其中硒以每100g组合物或每天0.01-0.5mg、优选0.02-0.1mg的量给药。
8.根据前述权利要求中任一项的用途，其中维生素C以每100g组合物或每天20至1000mg、特别是30至500mg、更特别是50至150mg的量给药。
9.一种用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人类受试者的脑萎缩的组合物，所述组合物包含治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22：6；DHA)、二十碳五烯酸(20：5；EPA)和二十二碳五烯酸(22：5；DPA)或其酯，以及(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合。
10.治疗有效量的下述物质的结合物：(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22：6；DHA)、二十碳五烯酸(20：5；EPA)和二十二碳五烯酸(22：5；DPA)或其酯，以及(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合，用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩。
11.一种防治和/或减缓患有脑萎缩的人受试者的脑萎缩的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22：6；DHA)、二十碳五烯酸(20：5；EPA)和二十二碳五烯酸(22：5；DPA)或其酯，以及(iii)维生素C和/或硒，并任选地与维生素E结合。
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说 明 书治疗脑萎缩的方法
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[0001]
本发明为医学营养领域，更具体而言，其涉及用于治疗患有脑萎缩或脑皱缩的受
试者的组合物。
背景技术
[0002]脑萎缩是脑衰老的特征，而且是影响脑的许多疾病的常见特征，其中萎缩的模式和进展速率取决于所涉及的疾病。脑萎缩或大脑萎缩被描述为神经元以及彼此之间联系的丧失，从而引起脑容积的缩小。萎缩可为普遍的，这意味着整个脑部已萎缩，或者它可为局灶性的，仅影响脑部的有限区域并导致该大脑控制区域的功能减少。显著脑萎缩的症状包括涉及多种认知功能的进行性认知障碍，也称为痴呆、癫痫发作和失语症，这是对语言的理解或产生或这两方面的破坏。
[0003]几种疾病可引起突触连接性的丧失和脑部的显著萎缩。脑部进行性神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨延顿氏病、皮质基底节变性、后皮质萎缩、多系统萎缩和进行性核上性麻痹，导致脑萎缩速率提高。它们最初导致特定大脑区域的局灶性萎缩，然后它们可逐渐发展为涉及整个大脑的普遍性萎缩，最终导致死亡。进行性脑萎缩提供了神经变性疾病和认知和/或记忆功能障碍的风险。[0004]在阿尔茨海默病中，突触丧失和萎缩是与认知障碍最强的结构联系。从疾病进程最开始，至疾病被确诊前，存在特定脑区域的突触丧失、突触连接性降低，以及进行性萎缩。脑部的一些区域(例如涉及短期记忆的区域)通常比其他区域更多且更早地受到影响，并且男性整体上比女性丧失更多的脑质量。脑萎缩可使用MRI来观察，并且通常不会以与神经影像所示的相同的程度影响全部区域。
[0005]提高阿尔兹海默尔受试者的营养的研究已表明干预组的神经认知结果有所改善，但是是否增加患有脑萎缩的受试者和有神经变性疾病风险的受试者的营养摄入尚未得到充分研究。
[0006]在最近的十年间，尿苷、胆碱和ω-3脂肪酸如DHA作为活性成分在治疗认知功能障碍方面，通常在与衰老相关的神经变性进程的背景下吸引人们的注意。已发现这些化合物用于膜磷脂合成的限速前体。WO 2012/125034记载了包含以下组分的组合物：i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；(ii)包含至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯的脂质部分，其中所述脂质部分包含小于2重量％的亚麻酸(ALA)，基于所有脂肪酸的重量计；iii)胆碱或其盐或酯；所述组合物用于防治或治疗神经外伤、创伤性脑损伤、大脑性麻痹和脊髓损伤。[0007]需要进一步研究饮食和营养干预是否有助于防治和/或减少脑萎缩。
发明内容
[0008]发明人已观察到，一旦将包含下述物质的结合物或产品给药至人受试者，脑萎缩的进展就可减缓：(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或
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说 明 书
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其酯；(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合。使用本发明的组合物可保持脑容量，特别是用于具有神经变性失调的(高或增加的)风险的受试者，所述神经变性失调的特征是脑萎缩，在一个特定的实施方案中为前驱性阿尔茨海默病。[0009]因此，本发明涉及治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及(iii)维生素C和/或硒，并任选地与维生素E结合，在制备用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者、特别是具有患阿尔茨海默病等神经变性疾病(高或增加的)风险的受试者的脑萎缩的产品中的用途。本发明还涉及(i)、(ii)和(iii)的结合，任选地与维生素E结合，用于制备用于治疗上减缓有此需求的人受试者的脑萎缩的产品中。优选治疗有效量的(i)、(ii)和(iii)是待给药至所述人受试者的组合物的一部分。本发明还涉及防治和/或减缓有此需求的人受试者脑萎缩的(治疗)方法，所述方法包括向所述人受试者给予治疗有效量的(i)、(ii)和(iii)。在一个实施方案中，人受试者疑似或确诊脑萎缩或处于神经变性或神经变性疾病的风险中。[0010]通过临床研究，本发明人出乎意料地发现，给予包含(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯，(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯，(iii)维生素C和/或硒的组合物，任选地与维生素E结合，示出显著降低海马体萎缩和降低脑萎缩。顺应性和耐受性均非常高，并且副作用相对较低。临床研究的结果汇总于实施例部分。附图说明
[0011]图1A示出随机分配为对照治疗或用本发明的组合物营养补充的一组患有脑萎缩的受试者的以cm3计的总海马体容积随时间的变化。在接受活性组合物的组中观察到海马体(左和右)萎缩显著减慢。
[0012]图1B示出了随机分配为对照治疗或用本发明的组合物营养补充的一组患有脑萎缩的受试者的以cm3计的的总脑容积随时间的变化。在接受活性组合物的组中观察到脑萎缩减慢。
[0013]图2示出了随机分配为对照治疗或用本发明的组合物营养补充的一组患有脑萎缩的受试者的认知功能随时间的变化。在接受本发明的活性组合物的组中观察到认知功能丧失减缓的临床相关趋势。图2A示出了所有随机受试者的结果，图2B示出了每个方案群体的结果。
[0014]图3示出了随机分配为对照治疗或用本发明的组合物的营养补充的同组患有脑萎缩的受试者的记忆功能的变化。在接受活性组合物的组中观察到记忆功能下降减缓。图3A示出了所有随机受试者的结果，图3B示出了每个方案群体的结果。[0015]图4示出了DHA、尿苷、维生素C、维生素E和硒的组合显著(p＜0.0001)改善了体外PC12细胞的神经突生长(neurite outgrowth)(以每个神经元的总神经突长度测量)。[0016]优选实施方案列表
[0017]1.治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合，在制备用于治疗上
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说 明 书
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防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩的产品中的用途。[0018]2.根据实施方案1的用途，其中需要治疗上防治和/或减缓脑萎缩的受试者患有神经变性疾病或有增加的患神经变性疾病的风险。[0019]3.根据实施方案1和2的用途，其中受试者患有阿尔茨海默病或有患阿尔茨海默病的风险。
[0020]4.根据前述实施方案任一项的用途，其中所述产品包含治疗量的维生素B6和/或维生素B12，包括其功能等同物。
[0021]5.根据前述实施方案任一项的用途，其中DHA以每100g产品或每天至少0.5g、优选0.5-5g的量给药。
[0022]6.根据前述实施方案任一项的用途，其中尿苷，作为尿苷、脱氧尿苷、尿苷磷酸盐、核碱基尿嘧啶和酰化尿苷衍生物的累积量，以每100g产品或每天0.1-5g、优选0.2-2.5g、更优选0.25-1g的量给药。
[0023]7.根据前述实施方案任一项的用途，其中硒以每100g组合物或每天0.01-0.5mg、优选0.02-0.1mg的量给药。
[0024]8.根据前述实施方案任一项的用途，其中维生素C以每100g组合物或每天20至1000mg、特别是30至500mg、更特别是50至150mg的量给药。
[0025]9.一种用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩的组合物，所述组合物包含治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及(iii)维生素C和/或硒，并任选地与维生素E结合。[0026]10.一种下述物质的结合物：治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及(iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合，在人受试者中用于治疗上防治和/或减缓有此需求的人受试者的脑萎缩。[0027]11.一种防治和/或减缓患有脑萎缩的人受试者的脑萎缩的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的(i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和(ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及(iii)维生素C和/或硒，并任选地与维生素E结合。具体实施方式
[0028]在整篇本发明中，可使用以下术语和缩写；
[0029]大脑萎缩的脑萎缩的特征为脑容积的逐渐丧失和突触连接性的丧失。通常使用MRI测定脑萎缩的扩散，其中测定脑容量和特定脑区域容量。海马体萎缩是指海马体所在的内侧颞脑区域的萎缩。海马体萎缩通常伴有陈述性、间歇性、空间性和情境性记忆行为的缺陷，海马体大小与记忆功能行为之间有可靠的关系。海马体萎缩是海马体硬化症(HS)和阿尔茨海默病(AD)的关键特征。在本发明的上下文中，脑萎缩和海马体萎缩被认为是需要治疗疗法的病理性或损伤性病症。
[0030]突触连接性意指不同神经元之间形成的连接，使得在所述神经元之间传递信号。所述突触在记忆形成方面起作用。突触发生为新的突触和突触连接的形成。
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几种疾病通常与脑萎缩的发展有关。萎缩可由阿尔茨海默病、脑瘫、老年痴呆、额
颞痴呆和血管性痴呆、皮克病、帕金森病、亨延顿病和其他会导致神经元中蛋白质毒性水平的增加的遗传性疾病、营养不良引起。
[0032]内侧颞叶萎缩(MTA)评分是指通过前脑桥水平的海马体的冠状T1w MRI图像确定的目测评分，并评估3个特征：1)脉络膜裂隙的宽度，2)侧脑室颞角的宽度和3)海马体高度，根据脉络膜裂隙扩大、颞角增大和海马体萎缩程度得到0至4的评分，其中在75岁以下的人中评分≥2被认为是异常的。
[0033]微型精神状态检查(MMSE)是指用于测量认知障碍(如阿尔茨海默病的诊断和纵向评估)的30分问卷。大于或等于24分(满分30分)的任何评分表示正常认知。在此之下，评分可以表示严重(≤9分)、中度(10-18分)或轻度(19-23分)认知障碍。可针对教育程度和年龄校正原始分数。
[0034]NTB测试是指成套神经心理测验(Neuropsychological Test Battery)，其包括若干经过验证的认知测试的组合、认知领域中受试者表现的顺从测试。NTB测试用于评估记忆功能和认知功能。
[0035]在本发明的一个方面，(i)、(ii)和(iii)是本发明组合物的一部分，所述组合物可用作包含一种或多种药学上可接受的载体材料的药物产品。[0036]在本发明的一个优选的方面，(i)、(ii)和(iii)是本发明组合物的一部分，所述组合物可用作营养产品(例如营养补充品，例如正常饮食的添加剂如增强剂)添加至正常饮食中，或用作完全营养品。营养产品优选包含至少一种选自脂肪、蛋白质和碳水化合物的组分。它优选包含30-60能量％(en％)碳水化合物、30至60能量％的脂肪和1至20能量％的蛋白质。应当理解，营养产品与药物产品的不同之处在于对给予组合物的受试者提供营养的营养物的存在，特别是蛋白质、脂肪、易消化的碳水化合物和膳食纤维的存在。优选符合食品用于特殊医学目的要求，优选根据通过引用纳入本文的EC指令FSMP 1999/21/EC的要求的组合物。它还可以含有例如矿物质、维生素、有机酸和调味剂的成分。
[0037]本发明的第一个方面提供治疗上防治和/或减少患脑萎缩和/或有患神经变性疾病风险的人受试者的脑萎缩，其通过喂食所述受试者以下组分进行：[0038](i)一种或多种尿苷和胞苷或其盐、磷酸盐、酰基衍生物或酯；和[0039](ii)至少一种二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5；DPA)或其酯；以及[0040](iii)维生素C和/或硒，任选地与维生素E结合，[0041]优选用于防治或治疗(减缓)脑萎缩。[0042]受试者为人受试者，优选成年人，更优选老年人，优选年龄为至少55岁。[0043]优选地，本发明的方法为特别是对患有脑萎缩的受试者，特别是对有患神经变性疾病风险的脑萎缩受试者，治疗上改善脑容积的保持和防治脑容积的丧失和/或防治脑萎缩的发展的方法。在本发明的一个实施方案中，受试者可有患前驱性阿尔兹海默病的风险或正患有前驱性阿尔兹海默病。[0044]“防治和/或治疗”旨在意指与患有同样的病症但没有给予本发明的组合物的未治疗的受试者的对照组相比，使用本发明的组合物可减缓脑容积的减小或脑萎缩的进程。[0045]根据本发明的另一个实施方案，所述组合物作为营养产品或营养补充剂提供。本
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发明的产品为肠内组合物，意欲口服给药。优选以液体形式给药。在一个实施方案中，食物产品为每100ml包含50至250千卡，更优选每100ml包含75至125千卡的液体组合物。[0046]优选地，该组合物每天至少一次对患者肠内给药至少12周，优选至少26周，更优选至少1年或至少2年。
[0047]本发明的方法或用途包括将包含上述成分(i)-(iii)的组合物和如下进一步描述的组合物给药至有此需求的受试者。[0048]ω-3LC-PUFAs[0049]本发明的方法、组合物或组合包含治疗上有效量的至少一种选自二十二碳六烯酸(22∶6；DHA)、二十碳五烯酸(20∶5；EPA)和二十二碳五烯酸(22∶5ω-3；DPA)的ω-3长链多不饱和脂肪酸(LC PUFA；具有18个或更多个碳原子的链长)，优选DHA和EPA中的至少一种。优选地，本发明的组合物或结合物含有至少DHA、更优选DHA和EPA。EPA转化为DPA(ω-3)，随后越来越多地将脑内DPA转化为DHA。因此，本发明的组合物或结合物优选还含有显著量的EPA，因此进一步刺激体内DHA的形成。[0050]LCPUFAs(DHA、EPA和/或DPA)优选作为甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯、游离脂肪酸或其盐或酯、磷脂、溶血磷脂、甘油醚、脂蛋白、神经酰胺、糖脂或其组合物提供。优选地，本发明的组合物或结合物包含至少甘油三酯形式的DHA。合适的ω-3LCPUFA和/或DHA来源包括金枪鱼油、(其他)鱼油、富含DHA的烷基酯、藻油、蛋黄或富含ω-3LCPUFA(例如磷脂酰丝氨酸-DHA)的磷脂。优选地，本发明的组合物或结合物包含提供ω-3LCPUFA(s)的鱼油。另一种特别合适的ω-3LCPUFA(s)来源为藻油。[0051]如果存在EPA、DHA和/或EPA，则DHA+EPA+DPA的总每日剂量合计为0.25-5g、优选0.5-5g、更优选0.75-2.5g每100g组合物，或以每日剂量计，为每天0.25-5g、优选0.5-5g、更优选0.75-2.5g。在一个优选实施方案中，这些量基于DHA和EPA(如果存在的话)的总和计。DHA优选以治疗量给药，优选以至少0.5g每100g、更优选0.5-5g每100g、最优选0.75-2g每100g组合物，或以每日剂量计，以至少0.5g每100g、更优选0.5-5g每100g、最优选每天0.75-2g给药。
[0052]就组合物、结合物或方法而言，组合物中总脂肪酸的ω-3LCPUFA(更优选DHA+EPA+DPA、最优选DHA+EPA)的比例优选为总脂肪酸的5至95重量％，更优选10至80重量％，最优选15至70重量％，甚至更优选20至60重量％。本发明的组合物或结合物优选包含基于总脂肪酸计的5至95重量％的DHA，优选基于总脂肪酸计的10至75重量％的DHA，更优选10至60重量％，甚至更优选10-50重量％，更优选10-40重量％，特别是至少20重量％的DHA，基于组合物或结合物的总脂肪酸计。本发明的组合物或结合物优选包含基于总脂肪酸计的5至95重量％的EPA，优选5至75重量％的EPA，甚至更优选5-50重量％，更优选5-25重量％，最优选5-15重量％，基于组合物或结合物的总脂肪酸计。[0053]在本发明的方法、结合物或组合物中，DHA与EPA的重量比优选大于1，更优选2∶1至10∶1，更优选2∶1至5∶1。将该比例考虑在内并优化DHA与其前体之间的平衡，以确保最佳效果，同时保持低量配方。
[0054]如果存在或给予花生四烯酸(AA)，则其涉及非常低量的AA，在本发明组合物、结合物或方法中的DHA/AA重量比表示为至少5、优选至少6。如果给予AA，优选其量为少于5g每100ml液体产品和/或少于300mg每100g干重的组合物或结合物。
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尿苷、胞苷和/或其等同物
[0056]本发明的方法、结合物和组合物包含治疗有效量的尿苷、胞苷和/或其等同物的一种或多种，其等同物包括盐、磷酸盐、酰基衍生物和/或酯。所述方法、结合物和组合物优选包含至少一种选自尿苷(即核糖基尿嘧啶)、脱氧尿苷(脱氧核糖基尿嘧啶)、尿苷磷酸盐(UMP、dUMP、UDP、UTP)、核碱基尿嘧啶和酰化尿苷衍生物的尿苷或其等同物。在一个实施方案中，除了尿苷(等同物)之外或为代替尿苷(等同物)，还可以使用胞苷、CMP、胞磷胆碱(CDP-胆碱)。优选地，根据本发明给予的组合物或结合物包含选自尿苷、脱氧尿苷、尿苷磷酸盐、尿嘧啶和酰化尿苷的尿苷源。[0057]优选地，本发明的方法、结合物和组合物包含选自尿苷单磷酸(UMP)、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷三磷酸(UTP)的磷酸尿苷；和/或磷酸胞苷(CMP、CDP、CTP、优选CMP)。在一个优选实施方案中，组合物或结合物包含至少一种前述尿苷磷酸。最优选地，本发明的组合物或结合物包含UMP，因为UMP可被身体最有效地吸收。因此，在本方法、结合物和组合物中包含UMP能够在最低剂量和/或低体积给予受试者时实现高效率或功效。优选地，本发明方法、结合物和组合物中至少50重量％、更优选至少75重量％、最优选至少95重量％的尿苷由UMP提供。给药剂量以UMP给予。尿嘧啶源的量可以用相对于UMP量(分子量324道尔顿)的摩尔当量来计算。
[0058]本发明方法优选包括给药尿苷(尿苷、脱氧尿苷、尿苷磷酸盐、核碱基尿嘧啶和酰化尿苷衍生物的累积量)，其量为0.1-5g、优选0.2-2.5g、更优选0.25-1g每100g组合物，或以每日剂量计，每天0.1-5g、优选0.2-2.5g、更优选0.25-1g。在一个实施方案中，本发明方法、结合物和组合物可以包括给予尿苷源，其浓度为0.1-5g、优选0.2-2.5g、更优选0.25-1g每100千卡产品，以UMP计算。术语产品、组合物和结合物可替换使用。[0059]维生素C、硒和维生素E[0060]本发明的方法、结合物和组合物包含治疗有效量的维生素C和/或硒，任选地结合维生素E。特别优选所述组合物包含维生素C和硒，并且任选地还包含维生素E，最优选本发明的组合物包含维生素C、维生素E和硒。[0061]维生素C包括其功能等同物，并且可以20至1000mg、特别是30至500mg、更特别是50至150mg每100g组合物，或以每日剂量计，以每天20至1000mg、特别是30至500mg、更特别是50至150mg的量存在。[0062]硒可以0.01-0.5mg、优选0.02-0.1mg每100g组合物，或者以每日剂量计，以每天0.01-0.5mg、优选0.02-0.1mg的量存在。
[0063]维生素E是指本领域已知的具有维生素E活性的化合物，通常为生育酚和/或其等同物。维生素E可以作为生育酚和生育酚等同物以10至200mg、特别是10至100mg、更特别是20至50mg每100g组合物，或者以每日剂量计，以每天10至200mg、特别是10至100mg、更特别是20至50mg的量存在。如本说明书中使用的术语“生育酚及其等同物”包含生育酚(例如α-和γ-)、生育三烯酚、其药学上和/或营养上可接受的衍生物及其任何组合。如本领域所公认的，上述数字基于α-生育酚等同物(α-TE)计。[0064]胆碱
[0065]在一个优选实施方案中，本发明的方法、结合物和组合物包含治疗有效量的胆碱、胆碱盐和/或胆碱酯。在本文中，术语“胆碱”应被视为包含所有这些等同物。优选胆碱盐。胆
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碱盐优选选自氯化胆碱、胆碱酒石酸氢盐或胆碱硬脂酸盐。胆碱酯优选选自磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱。本发明方法优选包括给药大于0.1g胆碱每100g、优选0.1至1g胆碱每100g，更优选0.2至0.5g胆碱每100g组合物或结合物，或者以每日剂量计，大于0.1g胆碱每100g、优选0.1至1g胆碱每100g、更优选每天0.2至0.5g胆碱。上述数字基于胆碱计，胆碱等同物或来源的量可以通过胆碱的摩尔当量来计算，基于104g/mol胆碱的摩尔质量来计算。[0066]B族维生素
[0067]在一个优选实施方案中，本发明的方法、结合物和组合物包含治疗有效量的至少一种选自维生素B6(吡哆醇、吡哆醛或吡哆胺或盐酸吡哆醇)、维生素B9(叶酸(folic acid)或叶酸盐(folate))和维生素B12(钴胺素)的B族维生素。功能等同物包含于这些术语内。优选地，本发明的组合物包含至少维生素B6和/或维生素B9，更优选至少包含维生素B6和B9，最优选维生素B6、B9和B12。优选地，给药维生素B6以提供100-500微克(mcg)、优选150-300微克的量，基于100g组合物或每天计。优选给药维生素B9以提供每100g组合物或每天50至1000μg、特别是100至1000μg、更特别是200至800μg的量。维生素B9可以作为叶酸盐存在，其包括叶酸，亚叶酸，叶酸盐的甲基化、亚甲基化和甲酰化形式，其盐或酯(例如C1-6烷基酯)，以及它们与一种或多种谷氨酸的衍生物，并且都是还原或氧化形式。优选地，维生素B9以叶酸形式提供。优选给药维生素B12以提供每100g组合物或每天0.5至20μg、特别是1至10μg。术语“维生素B12”包含本领域已知的所有钴胺素(cobalbumin)等同物。[0068]在一个优选实施方案中，本发明的方法、结合物和组合物还包含胆碱和至少维生素B6和/或维生素B9，更优选至少维生素B6和B9，最优选维生素B6、B9和B12。[0069]该组合物还可以包含易消化的碳水化合物部分，优选包括乳糖源和多糖源。[0070]实施例
[0071]为了更完整地理解本公开，现在结合附图参考以下实施例。[0072]实施例1.临床试验[0073]进行随机的、对照的、双盲的、平行组、多国的临床研究，其中311个前驱期受试者用本发明的组合物(活性组合物，每125ml：300mg EPA、1200mg DHA、106mg磷脂、400mg胆碱、625mg UMP、40mg维生素E、80mg维生素C、60mcg硒、3mcg维生素B12、1mg维生素B6、400mcg叶酸)治疗2年或接受等热量对照。
[0074]前驱期患者的入选标准定义如下：[0075]1)患有情景记忆障碍，在8个测试中有2个(下文进一步解释)界定为-1SD，其中至少记忆测试评分为-1SD。
[0076]2)潜在阿尔茨海默病病理学的证据[0077]-根据MRI图像测定的内侧颞叶萎缩≥1[0078]-大脑脊液测量：β-淀粉样蛋白比率＜1或p-tau＞60或t-tau＞350，或，[0079]-与阿尔茨海默病类型的变化相配的异常FDG-PET[0080]3)年龄在55-85岁之间
[0081]4)MMSE≥24(对于具有≤6年正规教育的受试者，≥20)[0082]5)受试者及看护人知情同意。
[0083]将总共311名受试者随机分入等热量(意向治疗者(itt)n＝158)或活性组合物(itt n＝153)组。对受试者随访24个月。
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用于临床试验的测试包括以下测试：
[0085]记忆
[0086]·FCSRT-延迟自由回忆＊≤8[0087]·FCSRT自由回忆-学习≤22
[0088]·WMS-R故事延迟回忆(％)≤75％[0089]·图形的WMS-R延迟回忆(％)≤75％[0090]非记忆[0091]·TMT A≥60[0092]·TMT B≥150
[0093]·符号数字替换测试≤35(120秒)[0094]·类别流畅性≤16(60秒)[0095]缩写：[0096]FCRT：自由和提示的选择性提醒测试，WMS：韦氏记忆量表(Wechsler Memory Scale)，TMT：连线测验(Trial Making Test)
[0097]图1A示出了以cm3计的总海马体体积随时间的变化。在活性组中观察到左和右海马体萎缩的显著减缓(左：p＝0.052；右：p＝0.016，数据未显示)。在接受活性组合物的组中观察到总海马体(左和右)萎缩显著减缓，在包括所有随机化受试者的itt组中MM斜率p＝0.011。(MM＊24个月p-0.008)
[0098]图1B示出了以cm3计的总脑体积随时间的变化。对于包括所有随机化受试者的itt组，在接受活性组合物的组(MM斜率p＝0.033，MM＊24个月p＝0.416和ANCOVA 24个月p＝0.420)中观察到总脑萎缩减缓。
[0099]图2示出了认知功能随时间的变化。为了评估认知功能，基于与认知功能相关的5个NTB测试(CERAD立即和延迟回忆和识别、类别流畅性、LDST)中至少4个来计算Z-评分。通过减去项目的基线平均值(在整个ITT人群中)并除以项目的基线SD(在整个ITT人群中)，对每个NTB组成进行计算。将得到的z-评分进行平均以获得复合z-评分。在接受本发明的活性组合物的组中观察到认知功能丧失减少的临床相关趋势。图2A示出了包括所有随机受试者的itt组，图2B示出了每个方案分析的受试者。
[0100]图3示出了相同组受试者的记忆功能随时间的变化。基于3个NTB组成(CERAD立即和延迟回忆和识别)中的受试者的表现计算记忆复合Z-评分。通过减去项目的基线平均值(在整个ITT人群中)并除以项目的基线SD(在整个ITT人群中)，对每个NTB组成进行计算。将得到的z-评分平均以获得复合z-评分。仅当所有3个NTB组成都可用时才计算记忆领域Z-评分。对于接受活性组合物的组，观察到记忆功能下降的减缓。图3A示出了具有所有随机受试者的itt组，图3B示出了每个方案分析的受试者。对于这两组，研究期间的治疗依从性均＞90％，并且研究方案通常耐受良好，在任一治疗组中均未报告严重不良反应。[0101]总体而言，对于随机分组至接受本发明的活性组合物的受试者组，观察到明显益处，其中海马体和全脑萎缩的发展较慢。
[0102]实施例2.健康大鼠暴露于本发明组合物对突触的影响[0103]在补充有尿苷(作为尿苷-5′-单磷酸)和含有DHA和EPA的鱼油(FO)的健康大鼠中评估根据本发明的维生素C、维生素E和硒的附加值。
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将大鼠随机分成4个治疗组，用4种干预饮食中的1种喂食6周(见表1)。在完成饮食
治疗后，处死大鼠，并分析脑样品中磷脂、突触蛋白和参与磷脂合成的2种酶(即胆碱磷酸胞苷转移酶(PCYT1A)和胆碱/乙醇胺磷酸转移酶(CEPT1))的水平。[0105]表1：包含不同量的抗氧化剂、鱼油和UMP的饮食。
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总磷脂和单独磷脂(磷脂酰肌醇除外)的水平、突触前蛋白Synapsin-1和突触后蛋白PSD-95的水平，以及酶PCYT1A和CEPT1的水平均通过鱼油加尿苷和抗氧化剂的组合补充得到显著增加，并且不通过补充鱼油加尿苷而不加抗氧化剂增加水平。结果见表2。[0109]表2.大鼠的含抗氧化剂、鱼油和UMP的特定饮食干预对磷脂、突触蛋白和参与磷脂合成的酶的脑水平的影响。值为平均值±SEM。＊P＜0.05与AOX低，单向ANOVA事后比较法(post hoc comparison)。
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结果表明，含有磷脂前体的饮食中的抗氧化剂、维生素C、维生素E和硒对前体在增
加膜磷脂和突触蛋白(神经突形成、突触发生和突触连接的间接指示剂)水平的影响上产生协同作用。此外，当补充结合物而不是通过补充FO加尿苷或单独的AOX时，磷脂合成中涉及的酶的水平也增加。[0113]实施例3：本发明的组合物对神经元生长的影响的体外研究
[0114]PC12嗜铬细胞瘤细胞在具有95％空气和5％二氧化碳的湿润气氛下在37℃下于DMEM(Gibco)中生长，所述DMEM补充10％胎牛血清(FBS)、青霉素(100单位/ml)和链霉素
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(100μg/ml)(Gibco)。将细胞以2000个细胞/孔的密度接种在96孔板中，24小时后补充含有20ng/ml神经生长因子(NGF)的培养基。将细胞暴露于本发明的组合物中或放置不补充(对照)。细胞补充的组合物示于表3中。细胞的补充进行三次。将这些条件与未补充的细胞进行比较。用这些结合物补充2天后，在每孔100μl培养基中使用钙黄绿素-AM染色剂(2ng/微升)对细胞进行染色，并使用Hoechst染色剂(0.6μg/ml)复染细胞核，并在37℃下培养20-30min。随后，使用Arrayscan XTI高含量成像系统拍摄FITC和DAPI图像(每孔25个图像)。使用Neuronal profiling Bioapplication算法量化神经突生长。最后，使用Graphpad Prism对所有数据进行统计分析。目前的数据显示，DHA、尿苷、维生素C、维生素E和硒的结合显著地(p＜0.0001)改善了体外PC12细胞的神经突生长(以每个神经元的总神经突长度测量)(图4)。
[0115]从感知和运动控制到认知的大脑功能在很大程度上取决于支持神经网络中协调活动的神经元之间的结构连接。在细胞水平上，神经元的形状(例如神经突长度、神经突和分支的数量)对于其功能是至关重要的，因为它确定神经元可以接收的输入数量以及如何处理这些输入。用暴露于本发明组合物的PC12细胞获得的结果表明响应于本发明组合物的新神经突形成。
[0116]表3.用包含营养素DHA、尿苷、维生素C、维生素E和硒的组合物补充PC12细胞2天。
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营养素浓度(μM)DHA15尿苷75维生素C225维生素E60硒0.24[0118]实施例4.本发明的液体组合物，每125mL包含以下组分：
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