*CN102120737A*
(10)申请公布号 CN 102120737 A(43)申请公布日 2011.07.13
(12)发明专利申请
(21)申请号 201010028043.2(22)申请日 2010.01.08
(71)申请人四川滇虹医药开发有限公司
地址610041 四川省成都市高新区天府大道
南沿线高新孵化园1号楼A座3楼6号申请人昆明滇虹药业有限公司
云南滇虹药业集团股份有限公司(72)发明人余红伟 龙绍疆 马燕如 朱绪明
周宁 李蕾蕾 梁勇 陈秀权陈逢春 官敬博(74)专利代理机构成都和睿达专利代理事务所
(普通合伙) 51217
代理人陶红(51)Int.Cl.
A61P 11/00(2006.01)A61P 11/08(2006.01)
C07D 311/30(2006.01)C07D 493/04(2006.01)A61K 31/352(2006.01)A61K 31/36(2006.01)A61K 31/357(2006.01)
(54)发明名称
一类黄芩素衍生物及制备方法和用途(57)摘要
本发明公开了一类新型的黄芩素衍生物，以及它们的制备方法和应用；药理实验证明，这类化合物具有明显扩张支气管的作用，可以用于制备预防或治疗因支气管收缩所致的慢性阻塞性肺
权利要求书 2 页 说明书 10 页
气肿的药物。
CN 102120737 ACN 102120737 ACN 102120743 A
权 利 要 求 书
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1.一类黄芩素衍生物，结构如式I所示：
式中R1、R2可以相同或不同，也可以相连或不相连，分别代表氢、C3-C20的烷基、C3-C20的烯基、烷基羰基、芳烷基羰基、取代或未取代芳基，R1、R2之间可以通过醚键、酯键相连形成5-8元环。
2.如权利要求1所述的黄芩素衍生物，其特征在于，当R1为H时，R2为苄基、正丁基、烯丙基。
3.如权利要求1所述的黄芩素衍生物，其特征在于，当R2为H时，R1为丙基羰基、苯乙基羰基、正辛烷基、月桂基羰基、乙氧羰基乙基。
4.如权利要求1所述的黄芩素衍生物，其特征在于，当R1和R2相连时为-CH2-、-CH2-CH2-。
5.如权利要求1所述的黄芩素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
黄芩苷(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与苄溴反应得到化合物1，反应温度为60-80℃，反应时间为8-24小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI；
化合物1在催化剂和溶剂的作用下得到化合物2，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸；
化合物2在催化剂和溶剂的作用下与溴代物、氯代物或有机羧酸于60-80℃或室温得到化合物3，反应时间为4-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF、CHCl3和CH2Cl2，所用的催化剂DCC/DMAP、三乙胺、K2CO3、NaI；化合物3在催化剂和溶剂的作用下得到化合物4，反应温度为室温，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括THF，所用的催化剂包括Pd/C；
6.如权利要求1所述的黄芩素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
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权 利 要 求 书
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黄芩苷(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与溴代物或氯代物反应得到化合物5，反应温度为60-80℃，反应时间为8-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI；
化合物5在催化剂和溶剂的作用下得到化合物6，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸；
7.如权利要求1所述的黄芩素衍生物的制备方法，包括以下步骤：
黄芩苷(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下得到黄芩素(Baicalin)，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸；
黄芩素(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与二溴代物、二氯代物反应得到化合物7，反应温度为60-80℃，反应时间为8-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI、三乙胺；
8.如权利要求1所述的制备黄芩素衍生物母核所用起始原料为黄芩苷。9.如权利要求1所述的黄芩素衍生物，其特征在于，在制备用于治疗呼吸系统疾病药物中的用途。
10.如权利要求1所述的黄芩素衍生物，其特征在于，在制备用于治疗因支气管收缩所致的呼吸系统疾病相关的慢性阻塞性肺气肿药物中的用途。
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说 明 书
一类黄芩素衍生物及制备方法和用途
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技术领域
本发明涉及一类具有扩张支气管活性的黄芩素衍生物，及以该类化合物作为有效药物成分在预防和治疗慢性阻塞性肺气肿中的应用。
[0001]
背景技术
慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)，简称慢阻
肺，是一种气道气流受限为特征的疾病，包括慢性支气管炎和肺气肿。这种气流受限通常呈进行性发展、不完全可逆，可伴有气道的高反应性。在美国乃至全球COPD都是第四位的致死病因，仅次于心脏病、脑血管疾病和急性呼吸道感染。亚太呼吸病学会的调查显示，亚洲11国COPD的患病率为6.2％，我国部分地区抽查表明，15岁以上人群的发病率约为3.12％。世界卫生组织预测，COPD将成为本世纪头25年世界范围的第三大致死病因，也是主要的致残病因。迄今没有一个药物被专门开发用于COPD的治疗，所有治疗COPD的方法都不能阻止肺功能的持续降低。COPD造成通气血流比例失调，引起高碳酸血症，严重时导致呼吸衰竭，因此，药物治疗的重点应在于改善症状和减少并发症。支气管扩张剂可扩张支气管，缓解气流受限及改善肺通气功能，是缓解COPD症状的主要措施。[0003] 黄芩(Scutellaria baicalensis)是一种常用的中药，在传统的中药方剂中被广泛应用于治疗发炎、发热、咳嗽、痢疾、黄疸、肝炎及高血压等症。黄芩素(Baicalein，B)又名黄芩苷元，由黄芩中的有效成分——黄芩苷(baicalin，BG)水解而得，属黄酮类化合物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、清除自由基、调节免疫、保护大鼠脑损伤等多种药理活性。本公司在筛选治疗COPD的中药处方时发现，黄芩素在体外实验中能显著扩张支气管平滑肌。[0004] 目前，有关通过对黄芩素进行结构修饰以增强其生物活性或增加其新的医药用途已有诸多报道。文献报道(J.Med.Chem，2004，47，555-5566)，通过对A环进行烷基化获得了一系列黄芩素衍生物，增强了其抑制P-糖蛋白170活性，活性测试结果表明这些化合物具有一定的细胞毒性；文献(药学学报，1997，32，140-143)报道了黄芩素衍生物具有抗HIV活性。另外，专利CN1427003报道了“黄芩素8-位取代的甲胺类衍生物及其制备方法”，CN101209257报道了“黄芩甙及黄芩素衍生物的医学用途”，CN1990481报道了“一种黄芩素衍生物其制备方法和用途”，CN101333205报道“周期素依赖蛋白激酶抑制剂黄芩素哌嗪衍生物及其制法”。但尚未见以黄芩苷为来源，对其结构改造以获得有较强的抗COPD黄芩素衍生物。
[0005] 研究表明，黄芩素的6位、7位羟基是其活性位点，本发明通过在黄芩素6位、7位引入不同的有效基团以增强其抗COPD的活性。
[0002]
发明内容
本发明提供了以黄芩苷为来源，制备具有扩张支气管活性的黄芩素类衍生物的方
法；本发明同时提供了该类衍生物在制备预防或治疗因支气管收缩所致的慢性阻塞性肺气肿的药物中的应用。
[0006]
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说 明 书
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本发明具有扩张支气管活性的黄芩素衍生物，结构如式(I)所示：
式中R1、R2可以相同或不同，也可以相连或不相连，分别代表氢、C3-C20的烷基、C3-C20的烯基、烷基羰基、芳烷基羰基、取代或未取代芳基，R1、R2之间可以通过醚键、酯键相连形成5-8元环。
[0010] 以黄芩苷为原料制备本发明所用的式(I)化合物时，对不同结构形式的式(I)化合物可以分别采用下述的方式得到。
[0011] 方法17-位黄芩素衍生物的合成方法
[0009] [0012]
黄芩苷(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与苄溴反应得到化合物1，反应温度
为60-80℃，反应时间为8-24小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI；
[0014] 化合物1在催化剂和溶剂的作用下得到化合物2，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸；
[0015] 化合物2在催化剂和溶剂的作用下于有机羧酸在室温下反应得到化合物3，反应温度为室温或60-80℃，反应时间为4-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF或CHCl3和CH2Cl2，所用的催化剂DCC/DMAP、三乙胺、K2CO3、NaI；[0016] 化合物2在催化剂和溶剂的作用下与溴代物、氯代物反应得到化合物5，反应温度为70-75℃，反应时间为8-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI；
[0013]
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说 明 书
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化合物3和化合物5在催化剂和溶剂的作用下分别得到化合物4和6，反应温度为室温，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括THF，所用的催化剂包括Pd/C。[0018] 方法26-位黄芩素衍生物的合成方法
[0019]
[0020]
黄芩苷(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与溴代物、氯代物反应得到化合物
7，反应温度为60-80℃，反应时间为8-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI；
化合物7在催化剂和溶剂的作用下得到化合物8，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸。[0022] 方法36，7-位环合衍生物的合成方法
[0021] [0023]
黄芩苷(1)在催化剂和溶剂的作用下水解得到黄芩素(Baicalin)，反应温度为60-80℃，反应时间为4-12小时；所用的溶剂包括乙醇、甲醇，所用的催化剂包括浓盐酸；[0025] 黄芩素(Baicalin)在催化剂和溶剂的作用下与二溴代物、二氯代物反应得到化合物9，反应温度为60-80℃，反应时间为8-32小时；所用的溶剂包括丙酮、DMF，所用的催化剂包括K2CO3、NaI、三乙胺。
[0026] 根据上述内容可以理解，本发明所公开的式(I)化合物采用上述合成方法制备时原料价格低廉，方法简单，成本较低，能满足工业化生产的需要，初步显示出较好的应用前景。
[0027] 对本发明的黄芩素衍生物进行了如下的生物活性测试：[0028] 1、黄芩素衍生物对KCl引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用[0029] 2、黄芩素衍生物对Ach引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用[0030] 3、黄芩素衍生物对His引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用
[0024]
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说 明 书
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黄芩素衍生物对KCl、His引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用所用阳性药为黄芩素和沙丁胺醇，对Ach引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用所用阳性药为黄芩素和氨茶碱，实验数据用SPSS9.0软件Probit法计算IC50。具体实施方式
[0032] 实施例16-苄氧基黄芩素的制备
[0033]
将13.38g(30mg)黄芩苷溶于50ml DMF中，加入无水K2CO320.76g(150mmol)，苄
溴3.56ml(30mmol)，无水丙酮300ml，置于500ml反应瓶中，干燥状态下回流，至反应完全，趁热过滤。滤液减压蒸干后，以10％的醋酸溶液调节pH至5，收集固体，加入装有乙醇200ml，浓HCl20ml的500ml反应瓶中，回流，至反应完全，减压蒸干溶剂、用水洗杂质后，用CH2Cl2-EtOH反复重结晶得到5.69g，两步总收率52.6％。
1
[0035] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.04(2H，m)，7.52-7.61(3H，m)，7.43(4H，m)，7.35(1H，m)，6.87(1H，s)，6.62(1H，s)，4.82(2H，s)；ESI-MSm/z：361[M+H]+，383[M+Na]+(positive mode)。
[0036] 实施例26-正丁氧基黄芩素的制备
[0034] [0037]
将4.46g(10mmol)黄芩苷溶于25ml DMF，加入无水K2CO3 6.92g(50mmol)，1-溴代
正丁烷1.07ml(10mmol)，无水丙酮150ml，置于250ml反应瓶中，干燥状态下回流，至反应完全，过滤，蒸干溶剂，以10％的醋酸溶液调节pH至5，收集固体，加入装有乙醇150ml，浓HCl 10ml的250ml反应瓶中，回流，至反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体1.57g，收率48.1％。
1
[0039] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.04(2H，m)，7.54-7.60(3H，m)，6.93(1H，s)，6.61(1H，s)，3.94(2H，m)，1.66(2H，m)，1.44(2H，m)，0.89(3H，m)；ESI-MS m/z：327[M+H]+，349[M+Na]+(pos i t ive mode)。
[0040] 实施例36-烯丙氧基黄芩素的制备
[0038] [0041]
[0042]
将4.46g(10mmol)黄芩苷溶于25ml DMF，加入无水K2CO36.92g(50mmol)，烯丙基
溴0.86ml(10mmol)，无水丙酮150ml，置于250ml反应瓶中，干燥状态下回流，至反应完全，
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趁热过滤，蒸干溶剂，以10％的醋酸溶液调节pH至5，收集固体，加入装有乙醇150ml，浓HCl 10ml的250ml反应瓶中，回流，至反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体1.74g，收率56.2％。
1
[0043] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.06(2H，m)，7.55-7.62(3H，m)，7.01(1H，s)，6.95(1H，s)，6.03(1H，m)，5.17(1H，m)，5.29(1H，m)，4.48(2H，m)；ESI-MS m/z：311[M+H]+，333[M+Na]+(positive mode)。
[0044] 实施例47-丙酰氧基黄芩素的制备
[0045]
[0046]
将7.20g(20mmol)6-苄氧基黄芩素，丙酸1.48g(20mmol)，DCC4.94g，DMAP 0.12g，
无水丙酮300ml，置于500ml反应瓶中，室温搅拌，至反应完全，过滤，蒸除溶剂，柱层析，得淡黄色粉末6.14g。将上述淡黄色粉末，10％Pd-C1.1g，THF 100ml，置于250ml反应瓶中，在H2状态下，室温反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体2.49g，两步总收率38.1％。
1
H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.06(2H，m)，7.56-7.60(3H，m)，6.98(1H，s)，6.67(1H，s)，2.62(2H，dd，J＝7.2，15.0)，1.14(3H，t，J＝7.4)；ESI-MS m/z：327[M+H]+，349[M+Na]+(positive mode)。
[0048] 实施例57-苯乙酰氧基黄芩素的制备
[0047] [0049]
将7.20g(20mmol)6-苄氧基黄芩素，加入苯乙酸2.72g(20mmol)，DCC 4.94g，DMAP
0.12g，丙酮300ml，置于500ml反应瓶中，室温搅拌，至反应完全，蒸干溶剂，柱层析，得淡黄色粉末5.92g。将上述淡黄色粉末，10％Pd-C 1.0g，THF100ml，置于250ml反应瓶中，在H2状态下，室温反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体1.91g，收率24.6％。
1
[0051] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.07(2H，m)，7.56-7.60(3H，m)，7.36(4H，m)，7.27(1H，m)，6.98(1H，s)，6.67(1H，s)，3.99(2H，s)；ESI-MSm/z：389[M+H]+，411[M+Na]+(positive mode)。
[0050] [0052] [0053]
实施例67-正辛烷氧基黄芩素的制备
[0054]
将3.60g(10mmol)6-苄氧基黄芩素，无水K2CO36.92g(50mmol)，1-溴代正辛烷
1.73ml(10mmol)，无水丙酮150ml，置于250ml反应瓶中，干燥状态下回流，至反应完全，蒸干溶剂，柱层析，得淡黄色粉末3.21g。将上述淡黄色粉末，10％Pd-C 1.1g，THF100ml，置
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于250ml反应瓶中，在H2状态下，室温反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体1.19g，收率31.1％。
1
[0055] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.06(2H，m)，7.54-7.60(3H，m)，6.95(1H，s)，6.92(1H，s)，4.09(2H，m)，1.76(2H，m)，1.42(2H，m)，1.24-1.32(8H，m)，0.83(3H，m)；383[M+H]+，405[M+Na]+(positive mode)。
[0056] [0057]
实施例77-月桂酰氧基黄芩素的制备
将7.20g(20mmol)6-苄氧基黄芩素，月桂酸4.0g(20mmol)，DCC4.94g，DMAP
0.12g，无水丙酮300ml，置于500ml反应瓶中，室温搅拌，至反应完全，过滤，蒸干溶剂，柱层析，得淡黄色粉末5.37g。将上述淡黄色粉末，10％Pd-C 1.0g，THF100ml，置于250ml反应瓶中，在H2状态下，室温反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体2.09g，两步总收率23.1％。
1
[0059] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.07(2H，m)，7.56-7.60(3H，m)，6.99(1H，s)，6.66(1H，
475[M+Na]+(positive mode)。s)，2.56(2H，m)，1.24-1.64(18H，m)，0.83(3H，m)；453[M+H]+，
[0060] 实施例87-[1′(乙氧羰基)]-乙氧基黄芩素的制备
[0058] [0061]
将3.60g(10mmol)6-苄氧基黄芩素，无水K2CO36.92g(50mmol)，1-溴代乙酸乙
酯1.12ml(10mmol)，无水丙酮150ml，置于250ml反应瓶中，干燥状态下回流，至反应完全，过滤，蒸干溶剂，柱层析，得淡黄色粉末3.21g。将上述淡黄色粉末，10％Pd-C 1.1g，THF100ml，置于250ml反应瓶中，在H2状态下，室温反应完全，过滤，柱层析，得淡黄色固体1.29g，收率36.2％。
1
[0063] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.08(2H，m)，7.57-7.64(3H，m)，7.04(1H，s)，7.01(1H，s)，4.67(2H，s)，4.67(2H，s)，4.16(2H，m)，1.22(3H，m)；ESI-MS m/z：379[M+Na]+，395[M+K]+(positive mode)[0064] 实施例96，7-二氧五环黄芩素的制备
[0062] [0065]
将44.6g(100mmol)黄芩苷，乙醇750ml，浓HCl 50ml加入1000ml反应瓶中，回流，至反应完全，蒸干乙醇，用水反复洗涤，固体用丙酮重结晶，得到黄色针状黄芩素22.9g，收率84.8％。
[0067] 将2.70g(10mmol)黄芩素，6.92g(50mmo l)无水K2CO3，二溴甲烷1.04ml(15mmol)，无水丙酮100ml，加入250ml反应瓶中，回流，至反应完全，过滤，蒸干溶剂，柱层析，得到淡
[0066]
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说 明 书
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黄色粉末1.05g，收率37.2％。
1
[0068] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ8.04(2H，m)，7.57-7.60(3H，m)，7.01(1H，s)，6.96(1H，s)，6.15(2H，s)；ESI-MS m/z：305[M+Na]+，321[M+K]+(positive mode)[0069] 实施例106，7-二氧六环黄芩素的制备
[0070]
将2.70g(10mmol)黄芩素，无水K2CO36.92g(50mmol)，二溴乙烷1.81ml(15mmol)，无水丙酮100ml，加入250ml反应瓶中，回流，至反应完全，过滤，蒸干溶剂，柱层析，得到淡黄色粉末1.28g，收率43.2％。
1
[0072] H-NMR(600MHz，DMSO)：δ7.98(2H，m)，7.48-7.52(3H，m)，6.87(1H，s)，6.67(1H，s)，4.30(2H，m)，4.21(2H，m)；ESI-MS m/z：319[M+Na]+，335[M+K]+(positive mode)[0073] 实施例11本发明的黄芩素衍生物生物活性测试结果[0074] 将豚鼠击头致昏后，迅速取出甲状软骨与气管分叉处之间的气管，放入通有5％CO2和95％O2混合气体的改良Krebs溶液(NaCl 128.3mmol/L，MgCl20.025mmol/
[0071]
L，KCl 4.69mmol/L，NaH2PO40.64mmol/L，NaHCO314.28mmol/L，葡萄糖5.05mmol/L，CaCl2 2.16mmol/L)，轻轻去除气管周围疏松结缔组织和脂肪后，剪成宽约3mm，长约20mm的螺旋条。将气管条置于改良Krebs液的恒温(37.0℃)中，持续通以5％CO2和95％O2的混合气体，并连接到Powerlab生物信号采集系统(澳大利亚埃德仪器有限公司)上，给予气管条标本静息张力1.0g。每10min换一次营养液，平衡60min后开始实验。[0075] 在浴槽中分别加入KCl4 0mmol/L、Ach 0.1mmol/L、His 0.02mmol/L(均为终浓度)，使标本张力迅速达最大张力平台，随后加入预先制备好的待筛选黄芩素衍生物溶液(50mg：1ml DMSO)100μl，孵育10min，筛选出具有舒张标本气管条的黄芩素衍生物。[0076] 1、黄芩素衍生物对KCl引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用[0077] 将气管条置于改良Krebs液中，10min换一次营养液，平衡60min后，加入KCl 40mmol/L(终浓度)。气管平滑肌迅速增加达张力平台，待张力无明显变化时，用改良Krebs液冲洗3次，将这一张力平台作为空白对照。平衡60min，每15min换1次营养液，再次用相同浓度KCl诱发气管平滑肌收缩，张力达平台5min后，用累计方法加入受试药物——黄芩素衍生物溶液，使浴槽内累计浓度为1.26×10-4、2.52×10-4、5.04×10-4、1.00×10-3、2.01×10-3mol/L，每次加药均在前一个剂量达到最大舒张效应后立即加入。试验完成后，以单纯加入KCl后气管平滑肌所达到收缩峰值为100％，计算加入不同浓度受试药物的抑制率。
[0078] 2、黄芩素衍生物对Ach引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用[0079] 将气管条置于改良Krebs液中，10min换一次营养液，平衡60min后，加入Ach 0.1mmol/L(终浓度)。气管平滑肌迅速增加达张力平台，待张力无明显变化时，用改良Krebs液冲洗3次，将这一张力平台作为空白对照。平衡60min，每15min换1次营养液，再次用相同浓度Ach诱发气管平滑肌收缩，张力达平台5min后，用累计方法加入受试药物黄芩素衍生物溶液，使浴槽内累计浓度为1.62×10-4、3.21×10-4、6.40×10-4、1.28×10-3、
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2.56×10-3mol/L，每次加药均在前一个剂量达到最大舒张效应后立即加入。试验完成后，以单纯加入Ach后气管平滑肌所达到收缩峰值为100％，计算加入不同浓度受试药物的抑制率。
[0080] 3、黄芩素衍生物对His引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用[0081] 将气管条置于改良Krebs液中，10min换一次营养液，平衡60min后，加入His 0.02mmol/L(终浓度)。气管平滑肌迅速增加达张力平台，待张力无明显变化时，用改良Krebs液冲洗3次，将这一张力平台作为空白对照。平衡60min，每15min换1次营养液，再次用相同浓度Hi s诱发气管平滑肌收缩，张力达平台5min后，用累计方法加入受试药物黄芩素衍生物溶液，使浴槽内累计浓度1.48×10-4、2.96×10-4、5.92×10-4、1.18×10-3、2.36×10-3mol/L，每次加药均在前一个剂量达到最大舒张效应后立即加入。试验完成后，以单纯加入His后气管平滑肌所达到收缩峰值为100％，计算加入不同浓度受试药物的抑制率。
[0082] 黄芩素衍生物对KCl、His引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用所用阳性药为黄芩素和沙丁胺醇，对Ach引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用所用阳性药为黄芩素和氨茶碱，实验数据用SPSS9.0软件Probit法计算IC50。，其结果如下表1：
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表1生物活性测试结果
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活性研究表明，黄芩素衍生物对KCl、Ach和His引起豚鼠气管条收缩的拮抗作用虽然不及沙丁胺醇和部分优于氨茶碱，但比黄芩素明显具有较强的拮抗作用。
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