一、实验原理
罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比：
If=kc
基此，测定一系列已如浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。
图1罗丹明B的分子结构
二、仪器与试剂 1．仪器
RF-5301PC分子荧光分光光度计；200 mL的容量瓶12支，2 mL的吸量管12支，250 mL烧杯12个。 2．试剂
l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液。 三、实验步骤
1．标准溶液的配制
取11只200 mL的容量瓶分别加入l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL,，用水稀释至刻度，摇匀。
2．绘制发射光谱
激发波长固定在556 nm, 在500-700 nm范围内扫描荧光发射光谱。 3．绘制标准曲线
荧光发射波长固定在640 nm处，从发射光谱上取系列标准溶液的荧光发射强度。 4．未知试样的测定
在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。
5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。 四、数据处理 1．原始数据 浓度/(l0-4 mg∙mL-1) 荧光强度 扣除空白
2．标准曲线绘制和未知样品含量计算。
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