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上呼吸道反复感染患儿产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药性分析

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垦 丝坠堡堂堂查 生 旦笪堑鲞箜23期Int J LabMed,December 2014,Vo1.35,No.23 ・临床检验研究论著・ 上呼吸道反复感染患儿产ESBLs大肠埃希菌 及肺炎克雷伯菌的耐药,陛分析 余宽丽 (云南省文山州砚山县人民医院检验科663100) 摘 要:目的 检测上呼吸道反复感染患儿产超广谱p一内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药情况。方法 用美国MICROSCAN细菌分析软件对反复上呼吸道感染患儿进行咽拭子培养、菌株鉴定及药敏试验,结果按美国临床实验室标 准4g ̄-(CLSI)标准判读,并进行回顾性分析。结果 在分离出的260株革兰阴性茵中,大肠埃希菌186例,肺炎克雷伯茵74 例,其中产ESBLs菌株分别为78例和42例,大肠埃希菌产ESBLs病原菌检出率为43.O1 (80/186);肺炎克雷伯茵产ESBI s病 原茵栓出率为48.65 (36/74)。产超ESBLs菌株对常用抗菌药物耐药率明显高于未产ESBLs菌株,二者对亚胺培南、哌拉西 林/4 ̄*k巴坦及阿米卡星高度敏感,但对部分头孢类抗菌药物呈多重耐药性。结论 反复上呼吸道感染患儿产ESBLs病原菌检 出率较高;该类细菌对常规抗菌药物呈较高耐药性,参照有效的病原菌培养及药物敏感试验,是保证临床抗菌治疗效果的关键。 关键词:上呼吸道感染; 超广谱 内酰胺酶; 耐药性; 儿童 DOI:10.3969/j.issn.1673—4l3O.2O14.23.023 文献标识码:A 文章编号:1673—413O(2014)23—3205—03 Detection of ESBLs—producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in children with recurrent upper respiratory tract infections Yu Kuanl (Department D Clinical Laboratory,Yanshan County People s Hospital,Yanshan,Yunnan 663100,China) Abstract:Objeetive To detect the extended-spectrum ̄-lactamases(ESBI s)producing pathogens by the throat swab culture in children with recurrent upper respiratory tract infections,and to analyze the drug resistance.Methods The throat swab culture, bacterial strain identification and drug sensitivity test were performed in the children with recurrent upper respiratory tract infec— tions by using the American MICROSCAN bacterial analysis software.The results were interpreted according to the standards of American Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).The retrospective analysis was performed.Results In 260 strains of isolated Gram—negative bacteria,186 cases were Escherichia coli and 74 cases were Klebsiella pneumoniae,in which ESB1 S—produ— cing strains were 78 cases and 42 cases respectively.The detection rate of the ESBLs—producing strains in Escherichia coli was 43.O1%(80/186),and which in Klebsiella pneumoniae was 48.65 (36/74).The resistance rates of ESBLs—producing strains to commonly used antibiotics were significantly higher than those of non-ESBLs—producing strains,both strains were highly sensitive to imipenem,piperacillin sulbactam and amikacin,but showed the multiple drug resistance to some cephalosporin antibiotics.Conclu‘ sion The detection rate of ESBLs—producing pathogens in the children with recurrent upper respiratory tract infection is higher. These bacteria show the higher resistance to conventional antibiotics,and it is the key tO ensure clinical antimicrobial therapeutic ef— ficacy according to the effective pathogen culture and the drug susceptibility testing. Key words:upper respiratory tract infection; extended—spectrum B—lactamases;drug resistance; children 反复呼吸道感染(RRI)是儿科常见病,发病率约为2O , 道感患者的致病性草兰阴性菌部分易产ESBI S菌株进行了分 严重影响儿童健康成长。患儿机体免疫力低下作为主要致病 析,以期对临床治疗该类患者带来帮助。 因素已得到公认。也有研究认为血清锌、硒等微量元素浓度降 1材料与方法 低与儿童上呼吸道感染有一定关联 ],当机体某种微量元素浓 1.1材料所有标本均来自本院2012年3月至2013年1O 度低下时,T、B细胞的增殖分化发生障碍,尤其是辅助性T细 月儿科门诊及住院患者,取标本前,嘱患者用无菌生理盐水反 胞功能受损,而易引起RRI发作;更多的观点则支持由于细菌 复漱口3~5次后,尽量咳出深部痰液并减少唾液污染,置于专 的滋生繁殖导致了患儿呼吸道炎症的发生,其中产超广谱p_内 用痰液收集杯内送检。患者痰液标本经过涂片镜检,以每低倍 酰胺酶(ESBI s)的细菌不仅对青霉素类、头孢菌素类和氨曲南 视野白细胞数大于25个且上皮细胞数小于1O个为合格标本, 等抗菌药物高度耐药,对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类抗菌药 反之,则需要重新留取标本。 物的耐药性也显高于非产ESBLs菌株,这也是导致临床治疗 1.2方法所有送检标本经过细菌培养,分离出可疑致病菌, 效果不佳的主要原因。为了解本市上呼吸道反复感染患儿中 经过转种得到纯培养菌株后,按说明书要求转种于美国MI— 产ESBLs细菌的现状及耐药性,笔者对本地区分离自上呼吸 cROSCAN细菌分析专用细菌鉴定及药敏试验板上,37℃培 作者简介:余宽丽,女,主管检验技师,主要从事微生物检验研究。 ・ 32O6 ・ 国际检验医学杂志2014年12月第35@Jg 23 ̄—2014,Vo1.35,No.23  LabMe&December lmJ———养18~24 h后,根据生化反应结果判定细菌菌种,依据NC— CI s标准判断药敏结果,由细菌鉴定软件判读为产ESBI s剐 疑菌株后,采用头孢噻肟、头孢噻肟+棒酸、头孢他啶、头孢他 啶+棒酸片行KB法扩散试验,两组药敏纸片中任一加棒酸组 的抑菌环直径与不加者相差5 mrfl,即可确证该菌为产ESBI s 细菌。操作步骤参照美国临床和实验室标准化协会(CI SI) 2O10年颁布的标准。 1.3仪器与试剂 美国MICROSCAN细菌分析软件、普通培 养箱;试剂由原软件开发公司提供,操作按厂家提供的SOP文 件进行。 1.4质量控制 质控菌株大肠埃希菌ATCC25922为三维试 验指示菌,肺炎克雷伯菌ATCC700603为ESBI s 性对照菌, 质控菌株均购自广东省临床检验中心。所有药敏纸片购自英 国Oxoid公司,注意纸片有效期,过程需严格质量控制。 1.5统计学处理 采用细菌耐药性监测软件WH()NET5.4 进行药敏试验及结果分析,运用SPSS15.0软件进行数理统计 分析处理,以P%0.05为差异有统计学意义。 2结 果 2.1产ESBI S菌株检出情况 在分离出的260株革兰阴性 细菌中,大肠埃希菌186例,肺炎克雷伯菌74例,其中产ES— BI S菌株分别为78例和36例,大肠埃希菌产ESBI S病原菌 检出率为41.93 (78/186);肺炎克雷伯菌产ESBLs病原菌检 出率为48.65 (36/74),二者对亚胺培南保持良好敏感性。 2.2产ESBI S与非产ESBI S大肠埃希菌耐药率比较 大肠 埃希菌产酶菌株对头孢吡肟、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、 头孢呋新、头孢唑啉及头孢他啶的耐药性显著高于不产酶菌株 (P%0.05),且产酶菌对第三代头孢类抗菌药物保持多重耐药 现象,但二者对于阿米卡星及哌拉西林/他唑巴坦却保持良好 敏感性,耐药率在2O.。0 左右,差异无统计学意义(P> 0.05),见表1。 2.3产ESBI s与非产ESBI S肺炎克雷伯菌耐药率比较 肺 炎克雷伯菌产酶菌株对头孢毗肟、头孢噻肟、头孢呋新、头孢唑 啉、头孢他啶的耐药性显著高于未产酶菌株(P<0.05);对阿 莫西林/克拉维酸、阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林 他唑巴坦的 敏感性较好,与未产酶菌株比较差异无统计学意义(P> 0.05),两者耐药率均低于5O.DO ,见表2。 表1 产ESBLs与非产ESBI S大肠埃希菌耐药率比较( ) 表2 产ESBLs与非产ESBLs肺炎克雷伯菌 耐药率比较( ) 3讨 论 肠杆菌科细菌导致儿童上呼吸系统感染的现象日益严重, 产ESBI S是此类细菌对口~内酰胺类抗菌药物,如头孢菌素、青 霉素等耐药的最重要机制。产ESBI S菌株检出率逐干F f 升 ,盲目采用抗菌药物治疗失败的现象,已经引起临床医生 的高度重视,选择敏感抗菌药物对该类患者进行有针埘性治 疗,显得尤为重要。 ESBLs是细菌质粒介导的能水解氧亚基G一内酰胺抗菌药 物,并可被 内酰胺酶抑制剂所抑制的一类酶,其产生很大程 度上是由于B一内酰胺抗菌药物尤其是第3代头孢霉素的不规 范应用有关。ESBI S主要由大肠埃希菌属和克雷伯菌产生, 能水解第3代头孢菌素,如头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酬,并 被BI A抑制剂如克拉维酸所抑制。儿章由于免疫机制尚未健 全,更易导致该类细菌感染,同种细菌在不同地区耐药现象差 异显著 ],提示其获得的耐药基因在不同地区菌种中代传,这 可能与不同地区临床医生用药习惯不同所带来的细菌耐药差 异现象有关,合理而规范地运用抗菌药物意义重大。 本研究中大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌之产ESBI S菌株都 接近50 ,表明在儿童上呼吸道感染中,产ESBI s菌与非产 ESBI S菌检出率已经非常接近,但产ESBI s菌与非产ESBI S 菌耐药现象明显不同,尤其是对头孢类抗菌药物的耐药现象差 异显著,提示临床医生在治疗该类患儿时,应该尽鼍避免盲目 用药或者尽量选择阿米卡星或亚胺培兰类抗菌药物,以免治疗 失败;再者,产ESBLs大肠埃希菌对头孢类抗菌药物普遍呈多 重耐药,提示l临床医生在治疗患儿时,应该避免使用该类抗菌 药物,尤其是部分惯用经验来诊治患者的医生,在选用抗菌药 物时,更应该引起重视;在条件许可时,尽量动员患者做细菌培 养并以药敏结果为指南;结果中2种病原菌(无论产酶与否)均 对阿米卡星、亚胺培南等呈高敏感性, 文献报道相近L 7 9J。因 此,临床治疗时,应该将该类抗菌药物作为首选,因其抗菌谱 广,对 内酰胺酶稳定,耐药机制少,对多种细菌,包括多蘑耐 药的肠杆菌属感染都有很好疗效。 研究中笔者还发现:在所有患儿中,体质越差者,其细菌培 养中越多见产酶菌感染,且培养出的细菌多为耐药菌,这Ⅱ『能 与患儿经常接受抗菌药物治疗或激素治疗不(下转第3209页) 国际检验医学杂志2014年12月第35卷第23期Int J Lab Med,December 2014,Vo1.35,No.23 ・ 32O9 ・ 已在献血者归队的检测中发挥着重要作用。确定献血者归队 法检测试剂的测定值与其真阳性的相关性[J].中华肝脏病杂志, 2005,13(2):255-258. 检测间隔期和检测频次与病毒血清学转换时间紧密相关。英 国原将HBsAg、抗一HIV、抗一HCV阳性反应献血者归队检测间 隔期定为6个月_8],后考虑到检测试剂灵敏度的提高,将间隔 E23王讯,刘宇宁,贾尧,等.丙型肝炎病毒抗体筛查阳性结果确证方 案的探讨I-J].中国输血杂志。2008,21(2):255—258. [3]刘宇宁,蔡菊英,刘晓音.血液筛查HBsAg、抗HCV假阳性献血 期调整为3个月。结合本中心献血者归队的检测模式,笔者建 议将HBsAg、抗一HCV的反应性献血者归队检测间隔时间定 者归队的调查分析EJ].中国输血杂志,2012,25(2):260—262. [43 Niederhausre C,Mansouri TB,Graziani M,et a1.Blood donor screening:how to decrease the risk of transfusion—transmitted 为3个月随访检测1次,6个月内随访2次,如果均合格则可 以恢复其献血资格。 hepatitis B virus?EJ].Swiss Med Wkly,2008,48(1):64—72. [5]谢云铮,杨军,周国平,等.上海地区Anti—HCV反应性献血这随 访研究EJ].临床输血与检验,2013,15(3):212-126. 在75例成功启动召回工作流程的献血人群中,完成全部 2次检测并关闭检测流程的只有40例献血者,尚有近一半献 血者没有完成2次检测,其原因主要是由献血者工作变动,电 话号码更换或已离开现有居住地等因素造成联系中断。为了 完善无偿献血者归队机制,血液中心应建立完整的献血者归队 工作流程,包括献血者条件复核、建立献血者永久性通讯联系 [6]王讯,贾尧,伍晓菲,等.血源肝炎病毒筛查试验结果的分析EJ]. 微生物与感染,2008,3(3):143—146. [7]Tynell E,Norda R,Ekermo B,et al,False—teactive mi—microbiolog— ic screening test results in Swedish blood dig is the probonors—how 方式及时信息传递、血样采集、检测模式以及建立献血者归队 档案等,实现献血者归队工作的规范化管理。 problem?A survey among blood centers and deferred dono[J]. transfusion,2007,47(1):80—89. 当前,随着无偿献血事业的发展,越来越多的公民加入无 偿献血队伍。减少因假阳性检测结果导致的献血队伍流失,建 立科学、合理的无偿献血者归队机制,应是当下各级采、供血部 门的重要任务之一。 参考文献 [1]任芙蓉,龚晓燕,李京京,等.献血员丙型肝炎病毒抗体免联免疫 E8]Moore MC,Howell DR,Barbara,JA.Donors whose blood reacrs flsely positive in transfusion microbiology screening assays need not be lost transfusi0n[J].Transfusion Medicine,2007,17(1):55— 59. (收稿日期:2014—04—21) (上接第3206页) Marco Maria D Andrea,Fabio Arena,Lucia Palleeehi,Gian Maria 当有关。激素的广泛使用,极易导致患者粒细胞缺乏和功能缺 陷,进而发生菌群失调并引发感染,提示临床医生在治疗普通 Rossolini.CTX—M—type ̄一laetamases:Asuccessful story of antibiot— ie resistance EJ].Int J Med Microbiol,2013,8(4):205 206. Kenneth E.Pierce,Harald Peter,Till T.Bachmann,Carmelo Vol— 细菌导致的上呼吸道感染患儿时,对激素的运用更应该慎重, 对抗菌药物的选择,需要结合本地区尤其是本院细菌耐药特点 进行适当调整,减少经验用药,参照药敏结果并规范用药,方能 提高感染治愈率。 参考文献 I-1]李桂贤.d,JL反复呼吸道感染与微量元素相关性探讨F-J3.微量元 素与健康研究,2012,29(1):20—21. pe,Rohit Mistry,John E.Rice,Lawrence J.Wangh.Rapid Detec— tion of TEM Type Extended—Spectrum p Laetamase(ESBL)Muta— tions Using Lights— On/Lights—。Off Probes with Single——Stranded DNA Amplification[J3.J Mol Diagnostics,2013,9(3):135—137. 鲍连生,董宗祈,虞涛,等.儿童感染菌中1913株产超广谱8一内酰 胺酶型别特点及耐药性研究I-J].临床儿科杂志,2009,9(4):461— 463. 陈和斌,陆小霞,夏维,等.婴幼儿下呼吸道感染痰检细菌分布和 耐药分析_J].实用儿科临床杂志,2O11,13(4):476—478. 姚毅,严谦,严仔敦,等.产超广谱B一内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎 [2]刘建华,刘新锋,帅金凤,等.儿童产超广谱 内酰胺酶菌株感染 危险因素分析[J].中国当代儿科杂志,2011,13(9):959—956. [3]杨永弘,马香.,'hAL呼吸道感染的细菌病原EJ].实用儿科临床杂 志,2011,13(4):486 487. 克雷伯菌耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2011,9(3):132— 133. I-4]李万华,秦惠宏,张泓,等.产ESBLs大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯 菌儿童分离菌株的耐药性和基因型检测EJ].中国感染与化疗杂 志,2009,9(5):355-357. (收稿I?t期:2014 04—18) 医学统计工作的基本内容 按工作性质及其先后顺序,可将医学统计工作分为实验设计、收集资料、整理资料、分析资料。实验设计是开展某项医 学研究工作的关键,包括医学专业设计和统计学设计,医学专业设计的内容包括研究对象纳入和排除标准、样本含量、获取 样本的方法、分组原则、观察(检测)指标、统计方法等。收集资料的方法包括各种试验、检测或调查,要求资料完整、准确、及 时、有足够数量、具有代表性和可比性等。整理资料包括原始资料的检查与核对、对资料进行分组与汇总等。分析资料即对 资料进行统计学分析,包括进行统计描述和统计推断。 

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