第３２卷第２２期 甘肃科技 Ｖ０１．３２ Ｎｏ．２２ ２０１６年１１月 Ｇａｎｓｕ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＮＯＶ ２０１６ 建立符合人类诊断标准的变应性 鼻炎大鼠模型初探★ 周柳青 ，刘勇强 ，张小兵 （１．兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科，甘肃兰州７３００００：２．兰州大学基础医学院人体解剖学研究所，甘肃兰州７３００００） 摘 要：建立符合人类诊断标准的变应性鼻炎大鼠模型。取６—８周龄的Ｗｉｓｔａｒ大鼠２７只。雌雄各半．随机分为模型 组（ｎ＝１２）和对照组（ｎ＝１２），另有３只空白大鼠用于被动皮肤过敏试验（ＰＣＡ）。模型组以卵清蛋白（ＯＶＡ）作为变应原 辅以氢氧化铝佐剂进行腹腔注射，完成基础致敏；之后用２％ＯＶＡ生理盐水进行鼻内激发。对照组以生理盐水替代 ＯＶＡ。模型组基础致敏阶段完成后，ＰＣＡ（＋），证明ＩｇＥ产生；鼻内激发阶段完成后，各大鼠行为学评分均＞５分。出现 喷嚏、鼻痒、流清涕等典型症状，鼻粘膜病理切片ＨＥ染色示嗜酸性粒细胞浸润 对照组无上述变化。本实验成功建 立了符合人类诊断标准的可重复的变应性鼻炎大鼠模型 关键词：耳鼻咽喉头颈外科；变应性鼻炎；大鼠模型：ＩｇＥ；嗜酸性粒细胞 中图分类号：Ｒ２４６．８１ 近年来变应性鼻炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ，ＡＲ）患病 级）。氢氧化铝佐剂制备：Ａ１Ｃ１，＋３ＮａＯＨ＝ＡＩ（ＯＨ） ＋ 率直线上升．全球患者超过５亿，围绕其预防、诊疗 ３ＮａＣ１。反应产物经过反复混匀、抽吸和洗涤后得到 所开展的科学研究成为热点＿ｌ ｌＡＲ是一种发生在鼻 新鲜配制的胶态氢氧化铝同 粘膜的Ｉ型变态反应疾病．其诊断要点为发作时典 １．２造模方法 型的临床症状、ＩｇＥ抗体阳性和鼻粘膜嗜酸性粒细 １．２．１基础致敏 胞浸润闭。此次，我们设计并建立了符合以上诊断标 模型组：Ｏ．３ｍｇＯＶＡ＋ｌｍｌＡ１（ＯＨ）３佐剂，腹腔注 准的ＡＲ大鼠模型．通过行为学再现了ＡＲ发作时 射，隔日１次，共７次。对照组：ｌｍＬ生理盐水＋ 的典型临床症状［３１．使用ＰＣＡ试验说明了ＩｇＥ抗体 ｌｍＬＡＩ（ＯＨ）。佐剂，腹腔注射，隔１３ １次，共７次。 阳性［４１．通过鼻粘膜病理切片ＨＥ染色展示了嗜酸性 １．２．２鼻内激发 粒细胞浸润［５１ 基础致敏阶段末次腹腔注射结束后隔日开始 １材料与方法 鼻内激发阶段。模型组：每日每侧鼻腔滴人２％ＯＶＡ 生理盐水２０ｕ１．连续１０ｄ。对照组：每日每侧鼻腔滴 １．１动物与试剂． 人生理盐水２０ｕ１．连续１０ｄ １．１．１ 实验动物及分组 １．３模型评价项目 ６ ８周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠（兰州大学实验动物中心 １．３．１行为学观察 提供），共２７只，雌雄各半，体重１８０～２２０ｇ，ＳＰＦ级。 激发后即刻至３０ｍｉｎ内．用数码摄像对大鼠行 在清洁空调动物房饲养．避免常见过敏原存在．早 为进行记录，观察动物挠鼻、喷嚏、流涕症状。评分 晚１２ｈ间断照明。随机分为两组，每组１２只。第１ 标准见表ｌｌ３一 组为模型组：第２组为对照组。另有３只空白大鼠 表１ 变应性鼻炎大鼠 用于被动皮肤过敏试验（ｐａｓｓｉｖｅ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｎａｐｈｖ． １ａｘｉｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＡ）。 １．１．２药品与试剂 卵白蛋白（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＯＶＡ，美国Ｓｉｇｍａ公司，Ｖ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１１６０４４９）。 １２８ １．３．２ ＰＣＡ反应 甘肃科技 第３２卷 血清制备：基础致敏完成后．自模型组和对照 组中随机各取３只大鼠．脱毛开胸心脏采血约 ５ｍＬ。血液样本于４℃保存２～４ｈ．随后离心（３０００ ｒｐｍ，４￣Ｃ）以获得血清。 另取空白大鼠３只．麻醉后脱毛．背部皮下分４ 个区域，每个区域１个注射点，每点间隔大于２ｃｍ。 将所制备的各组血清原液．分别皮内注射于相应空 白大鼠背部皮肤．０．１ｍＬ／点。７ｈ后尾静脉注射含有 图１ 鼻粘膜ＨＥ染色（４０ｘ）模型组鼻粘膜大量嗜酸性 粒细胞增多，杯状细胞增多，部分粘膜上皮脱落 ３讨论 相同致敏剂量的抗原和伊文思蓝（Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ．北京 索莱宝科技有限公司）等量混合液，共ｌｍＬ。３０ｍｉｎ 后处死大鼠，剥离背部皮肤，测量蓝斑直径。直径大 于５ｍｍ者判断为阳性¨８１ １．３．３组织病理学评价 鼻标本提取：末次激发１ｈ后，各组大鼠以１０％ 水合氯醛３００ｍｇ／ｋｇ行腹腔注射。麻醉后取鼻中隔粘 膜固定于１０％中性甲醛溶液中、石蜡包埋．制成 ４ｕｍ厚切片 石蜡切片常规脱蜡入水后做ＨＥ染色． 用以观察鼻粘膜的嗜酸性粒细胞浸润等组织病理 学改变、 １．４统计学分析 计数结果以“均数±标准差”表示．应用 ＳＰＳＳ１７．０统计软件进行统计学分析．采用单因素方 差分析进行组件比较．采用ｑ检验进行两两比较． 以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义 ２结果 ２．１行为学评分 每次鼻内激发后．模型组动物均出现频繁挠 鼻、喷嚏及流水样涕，每只的叠加量化评分都大于５ 分，平均评分为（７．６±０．７）。对照组大鼠激发后，偶有 挠鼻，无其他上述症状，叠加量化评分为（１．９±１－３）。 两组的行为学评分比较有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。 ２．２ ＰＣＡ反应 模型组ＰＣＡ反应（＋），对照组ＰＣＡ反应（一） ２．３ ＨＥ染色 模型组中除去ＰＣＡ试验已用去的３只大鼠．剩 余９只中有３只可见鼻粘膜嗜酸性粒细胞增多．杯 状细胞增多，部分粘膜上皮脱落（如图１所示）。对 照组鼻粘膜均未见嗜酸性粒细胞及杯状细胞增多． 粘膜上皮排列整齐 目前国内外复制、评价ＡＲ动物模型尚无统一 标准【９］ Ｗｉｓｔａｒ大鼠是常见的模型动物．通常以ＯＶＡ 作为变应原致敏．所建的ＡＲ模型常以行为学评分 作为评价标准．不够客观［ＩＯＡ１】。因此尝试建立了此模 型．并用人类的ＡＲ诊断标准对其进行了初步评价 ＡＲ是机体暴露于变应原后主要由ＩｇＥ介导的 鼻粘膜非感染性慢性炎性疾病．其确诊需要检测针 对变应原（与病人病史有关的）的ＩｇＥ反应或检测血 清中的ＩｇＥ．临床常用的方法有皮肤针刺试验 ｆｓｋｉｎｐｒｉｃｋｔｅｓｔ．ＳＰＴ）Ｉ￣２１。本试验采用ＰＣＡ反应作为检 测ＩｇＥ的手段．其原理与ＳＰＴ相同．都是利用抗原与 注射部位的肥大细胞上的抗体起反应．导致组胺释 放而出现局部过敏反应 因此可准确的判断出Ｉ型 变态反应的标志ＩｇＥ的产生 嗜酸性粒细胞升高是人类ＡＲ诊断的重要客观 指标［１３－１４］常使用无创的鼻分泌物涂片为手段．在高倍显 微镜下观察嗜酸性粒细胞比例＞５％作为诊断标准 由 于大鼠鼻腔容积小．提取鼻分泌物较困难．因此我们选 用经典的病理学诊断方法——鼻粘膜病理切片ＨＥ染 色．来评价鼻粘膜嗜酸性粒细胞的变化 经过与对照组 比较，清晰的观察到模型组鼻粘膜嗜酸性粒细胞增多． 从而作出ＡＲ的诊断．这也是临床上最为可靠、常用的 诊断方法 参阅以往关于建立变应性鼻炎动物模型的文献． 此次研究以人类变应性鼻炎诊断标准为依据．在 Ｗｉｓｔａｒ大鼠上再现了变应性鼻炎发作时的临床症状及 诊断指标一ＩｇＥ和嗜酸性粒细胞增高．且所选用的评 价手段简便易行、成本低廉、可操作性及特异性好．但 成模率仍有待提高 参考文献： ［１］ Ｂｏｕｓｑｕｅｔ Ｓｃｈｕｎｅｍａｎｎ ＨＪ，Ｓａｍｏｌｉｎｓｋｉ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ ａｎｄｉｔｓｉｍｐａｃｔｏｎ ａｓｔｈｍａ （下转第１１８页） １ｌ８ 甘肃科技 第３２卷 ３讨论 糖尿病为慢性终身性疾病．控制血糖和并发症 是治疗糖尿病的重点。可以提高患者的生活质量。 有循证医学证据表明，生活方式干预、控制饮食、控 调整患者的心理问题，因此效果明显［６１。笔者认为护 理人员参与的健康教育方式的推广使用．必须具备 以下条件：（１）财政支持力度较大，有充足的资金投 入基本公共卫生服务项目；（２）基层护理人才充足， 素质较高．对社区糖尿病等慢病的护理技术比较熟 悉；（３）居民自我防病意识较强，文化水平较高，能 够配合社区医生进行慢病管理 以上三条在我国经 济条件较好的省份比较容易实现．推广起来难度不 大，但是在西部贫困地区推广起来可能较为困难． 但仍然值得探索 参考文献： 【１】 张萌，赵敏，陈延丽．北京市某医院糖尿病患者健康教育 的效果评价［Ｊ］，中国健康教育，２０１３，２９（２）：１７９—１８０． 【２】 魏伟，王旭辉，罗阳峰．国家基本公共卫生服务项目实施 制血糖、降低血脂等措施可以显著降低糖尿病并发 症和死亡风险嘲。健康教育的最终目的就是改变人 们的不良生活方式。本研究探索由基层护理人员参 与的新型健康教育模式对２型糖尿病病人的应用 效果：调查问卷显示．护理人员参与的新型健康教 育模式明显可以提高患者的糖尿病防治知识水平 （Ｐ＜０．０５）；通过提高患者的防治知识水平，进而改变 日常不良行为．最终空腹血糖和餐后２小时血糖控 制率、并发症发生情况都比常规健康教育模式效果 好（Ｐ＜Ｏ．０５）。 效果评价［Ｊ］，中国初级卫生保健，２０１３，２７（１０）：１—５． ｆ３１ 陆锦能．都匀市国家基本公共卫生服务项目糖尿病实施 效果分析［Ｊ】，基层医学论坛，２０１３，１７（１）：５３—５５． 叼 尽管《国家基本公共卫生服务项目》要求基层 医生可以进行上门随访和健康指导．但是由于我国 社区医生缺口较大，服务人Ｅｌ多．社区医生多数采 ｆ４］ 柳鹏，只净，王勃诗．健康教育对糖尿病住院患者营养知 信行的影响［Ｊ】，中国健康教育，２０１１，２５（４）：３６６—３６８． ［５】 中华医学会糖尿病分会．中国２型糖尿病防治指南【Ｊ】． 中华全科医师杂志。２０１３，１２（８）：６７５—６９６． 取电话随访。对于患者健康教育效果、存在的个性 化问题以及行为改变的长期性监测方面显得不足。 而护理人员参与的健康教育方式可以定期上门面 对面进行健康指导．确定每个人的重点内容．针对 不同的病情提出个性化的健康教育处方．同时可以 ［６】 李燕玲，唐蕾．护理志愿者参与型模式在社区２型糖尿 病患者健康教育中应用的效果研究叨．２０１２，１９（２Ｂ）：９－１ １． （上接第１２８页） （ＡＲＩＡ）：Ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ １０ ｙｅａｒｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｎｅｅｄｓ田． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＡｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１２，１３０（５）： １０４９－１０６２． ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ａｎｄ ５－ｈｙｄｒｏｘ ｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｅｉｅｎｃｅｓ，１９６３，２（１２）：９１７－９２７． 李萌，魏肖云，戴启刚，等．变应性鼻炎动物模型的研究现状 ［２］ Ｇｒｅｉｎｅｒ ＡＮ，Ｈｅｌｌｉｎｇｓ ＰＷ，Ｒｏｔｉｒｏｔｉ Ｇ，ｅｔ １ａ．Ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ 叨．现代中西医结合杂志，２０１３，２２（１２）：１３６０－１３６３． 叨．Ｌａｎｃｅｔ，２０１ １，３７８（９８０９）：２１ １２－２１２２． ［３］ 赵秀杰，董震，杨占泉．鼻超敏反应实验模型的建立叨．中华 耳鼻咽喉科杂志．１９９３，２８（１）：１７—１８． 【４］ 马毅，桂岩，王有虎，等．１８１３一甘草次酸对变应性鼻炎大鼠 李钦，李玉芬胨彦林，等．白细胞介素５和１３受体对变应性 鼻炎大鼠血管细胞黏附分子ｌ及干扰素的影响 中华耳 鼻咽喉头颈外科杂志．２０１２，４７（８）：６３８－－６４１． 江英，席克虎，陈小婉，等．１８１３一甘草次酸对变应性鼻炎大鼠 鼻黏膜纤毛超微结构的影响叨．第二军医大学学报，２０１５，３６ 鼻粘膜上皮细胞紧密连接的影响【【ｌ ２０１４，２８（２０）：１５９０－１５９４． ［５］ Ｍｏｔａ Ｌ Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ．Ｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ＂ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９６４，７：６８１－－６９９． （１）：２６－３３． 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会鼻科组．中华医学 会耳鼻咽喉头颈外科分会鼻科学组．变应性鼻炎诊断和治 疗指南（２０１５年，天津）叨．中华耳鼻咽喉头颈外科杂志， 【６］ Ｓｋｏｎｅｒ ＤＲ．Ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ：Ｄｅｉｆｎｉｔｉｏｎ，ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ｄｅｔｅｃ ｔｉｏｎ，ａｎｄｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎｌｍｍｕｎｏｌ， ２０１６，５ １（１）：－１９．６ Ｎａｃｌｅｒｉｏ，ＲｏｂｅｒｔＭ．ＡｌｌｅｒｇｉｅＲｈｉｎｉｔｉｓ［Ｊ］．ＮｅｗＥｎｇｌｎｄＪｏｕｒａｎａｌｏｆ ２００１，１０８（１）：Ｓ２－￥８． 赵宇，ＣＡｎｄｒｅｗｖａｎＨａｓ８ｅ１ｔ，吴港生，ｅｔａＬ卵白蛋白经鼻致敏 建立变应性鼻炎动物模型叨．中华耳鼻咽喉头颈外科杂志， ２００５，４０（３）：１７５—１８０． ［８］ Ｍｏｔａ Ｉ．Ｐａｓｓｉｖｅ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３２５（１２）：８６０－８６９． ＳｔｏｎｅＫＤ，ＰｒｕｓｓｉｎＣ，ＭｅｔｃａｌｆｅＤＤ（２０１０）ＩｇＥ，ｍａｓｔｃｅｌｌｓ，ｂａｓｏｐｈｉｌｓ， ａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ．ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎｌｍｍｕｎｏ１１２５（２）￣．７３－ｓ８ｏ．ｄｏｉ：１０． １０１６／ｊ．ｊａｃｉ．２００９．１ １．０１７．