AKTA使用方法

AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱

（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。

（2）洗泵。点击Pumps→Start pump A wash 和Start pump B wash。用QA buffer冲洗pump A，用QB buffer冲洗pump B。

（3）洗系统（管道）。将Conc%B改为100%，点击Start system wash。

（4）改流速，平衡柱子。将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2 mL/min, 0.4mL/min），点击Set flow rate。然后选择柱位。用QB buffer平衡Q柱4-5个柱体积，再用QA buffer平衡Q柱4-5个柱体积。

（5）准备收集盘，设置运行程序。准备烧杯收集outlet。

（6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。

（7）Elution, 运行洗脱程序。（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）

（8）及时将outlet取出并保存好。

（9）收集收集管，并将buffer放回。

Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)

（1）浓缩。将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。

（2）洗泵。用Superdex buffer冲洗pump A。

（3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。

（4）平衡。用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。

（5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。

（6）上样，运行程序。（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）

（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。

（8）根据分子筛图和SDS-PAGE电泳图，选择最终收集的样品。分装到1.5mL Ep管中，置于-80℃冰箱保存。