LIAISON化学发光免疫分析仪检测的性能验证

论著•临床研究

LIAISON化学发光免疫分析仪检测的性能验证^

陈兰兰s邵婧s刘义庆1△，张培莉s牛登冉s段文冰s赵万辉s张栋2

(山东大学附属省立医院：1.临床医学检验部，2.泌尿外科，济南250021)

摘要：目的验证LIAISON化学发光免疫分析仪检测产前筛查优生四项（TORCH)的分析性能。 方法参考美国临床和实验室标准化协会（N C C L S)系列文件和相关文献，结合工作实际，设计验证方案，并对

LIAISON化学发光免疫检测系统测定弓形虫IgG抗体（T〇x IgG)、弓形虫IgM抗体（T〇x IgM)、风疹病毒IgG

抗体（Rub IgG)、风參病毒IgM抗体（Rub IgM)、巨细胞病毒IgG抗体（CMV IgG)、巨细胞病毒IgM抗体

(CMV IgM)、单纯疱疹病毒IgG抗体（HSV IgG)、单纯疱疹病毒IgM抗体（HSV IgM)的精密度、准确度、分析 线性范围、临床可报告范围和生物参考区间等进行验证和评价，并将实验结果与厂家（意大利索灵）提供的分析 性能或公认的质量指标进行比较。结果批内不精密度CV值在3. 58%〜7. 03%，均小于规定的范围；批间不 精密度CV值在3. 13%〜10. 73%。线性范围验证回归系数a值在0. 97〜1. 03，r2>0. 95,线性均符合要求。 生物参考区间及可报告范围均符合要求。结论 LIAISON化学发光免疫检测系统检测分析性能符合临床要 求，测定结果灵敏度高，特异度好，稳定性强，检测范围宽，有良好的准确性和重复性，适合应用于临床。

关键词：化学发光免疫分析；准确度；精密度；性能验证

DOI：10. 3969/j. issn. 1673-4130. 2018. 02. 007 文章编号d673-4130(2018)02-0149-(M

中图法分类号：文献标识码

：A

R392. 33

Performance verification of LIAISON chemiluminescence immunity analyzer*

CHEN Lanlan1 .SHAOJtng1 ,LIUYtqtng1A ,ZHANG Petit1 ,NIUDengran1 ?

DUAN Wenbtng1 ,ZHAO Wanhut1 , ZHANG Dong2

(1. Department of Clinical Laboratory ;2. Department of Urology ^Shandong Provincial Hospital

Abstract ： Objective

A ffiliated to Shandong University j Jinan j Shandong 250021,China)

To verify the performance of LIAISON chemiluminescence immunoassay analyzer in

the prenatal screening for TORCH.

Methods

Reference to the US Institute of Clinical and Laboratory Stand-

ards(NCCLS) series of documents and literature and combining with actual work,we designed the verification program,and tested and evaluated the LIAISON chemiluminescent immunoassay systems for the measurement precision,accuracy,linearity analysis, clinical reportable range and biological reference intervals of Tox IgG, T〇x IgM，Rub IgG，Rub IgM，CMV IgG，CMV IgM, HSV IgG，HSV IgM. We also compared the results with analysis performance provided by manufacturers (Italy LIAISON) or recognized quality indicators. Intra-assay imprecision CV values were between

3. 58% — 7. 03%, which were less than the predetermined

range；inter-assay imprecision CV values were between 3. 13% 一10. 73%. Linear range validation regression coefficients a values were between 0. 97 一1. 03 and r2^>0. 95. The linear relationship met the requirements. Both biological reference interval and reportable range meet the requirements. Conclusion The performance of

LIAISON chemiluminescence immunoassay detection system satisfied the clinical requirements ? and the meas­urement results had advantages of high sensitivity, specificity, stability, wide detection range, good accuracy and repeatability,which was suitable for clinical application.

Results

Key words： chemiluminescence immunoassay;

accuracy; precision； performance verification

LIAISON化学发光免疫分析的原理是将抗原或 体结合到固相和抗原或抗体标记物，构成夹心。第二步孵育中，抗原或抗体标记物与已结合在固相上的免

疫复合物反应，未结合的物质被洗掉。然后加人启动

抗体包被磁珠（固相）并结合于异鲁米诺衍生物。在

第一步孵育中，校准品、血清或质控品中的抗原或抗

^ 基金项目：山东省自然科学基金资助项目（ZR2016HM52);山东省科学技术发展计划资助项目（2014GGH218041);山东省临床重点专科

建设项目经费资助（鲁卫医字[2013]26号）。

作者筒介：陈兰兰，女，技师，主要从事免疫学检验工作研究。

A 通信作者，E-mail:yqliU1979®163. com。

本文引用格式：陈兰兰，邵婧，刘义庆，等.LIAISON化学发光免疫分析仪检测的性能验证[J].国际检验医学杂志，2018,39(2): 149-152.

• 150 •囯际检验医学杂志2018年1月第39卷第2期 Int J Lab Medjanuary 2018，V〇1.39，N〇.2

试剂产生化学发光反应，光电倍增管检测光信号，得 出相关光度数值（RLU)，其与校准品、血清或质控中 抗原或抗体浓度呈正比，通过相关计算得出结果。参 照美国临床实验室标准化委员会（N C C L S)相关实验 室认可的条款要求和《医疗机构临床实验室管理办 法》的要求，为了保证检验质量，在引人新仪器设备和 开展新项目，以及每年需要对仪器设备的性能进行方 法学验证，包括准确度、精密度、线性范围、生物参考 区间、可报告范围等方面[1\"]。按照实验室标准化的 要求，本实验室LIAISON化学发光免疫检测系统测 定血清 Tox IgG、T〇x IgM、Rub IgG、Rub IgMXMV 和批间精密度应小于该项目的分析质量目标，结果与

厂家性能要求比较。

1.3.3 线性范围验证根据EP6-A2和EP7-A2文 件的要求，取高值和低值标本各1份，按如下配比制 备不同浓度的标本，标本1:低浓度标本；标本2:3份 低浓度标本与1份高浓度标本混匀；标本3:2份低浓 度标本与2份高浓度标本混匀；标本4:1份低浓度标 本与3份高浓度标本混匀;标本5:高浓度标本。检测 时按标本1至标本5、标本5至标本1排列，每个标 本测量2次，记录浓度。以理论浓度为纵坐标〇〇,实 测浓度为横坐标(X)。由统计学计算出决定系数（r2) IgG、CMV IgM、HSV IgG、HSV IgM 的精密度、准确 度、分析线性范围、临床可报告范围和生物参考区间 等进行验证，现将结果报道如下。

1

材料与方法

1.1标本来源选取2015年6月山东省立医院门

诊患者的预留样本20例，溶血、黄疸、脂血等标本剔 除，均经LIAISON化学发光免疫分析仪检测 TORCH，用于线性分析验证，上述所有样本均为日常 检测剩余标本。

1.2仪器与试剂LIAISON化学发光免疫分析仪，由 意大利索灵公司所生产，拥有15个试剂位，测试速度达 每小时180个测试，目前可检测项目有80多项。检测 试剂为索灵原装试剂，仪器所使用的程序、试剂、校准 品、质控品均由厂家提供，校准品和质控品的标识值必 须与分析系统的方法、程序相一致。试剂批号T〇x IgG (004066X/1 )、Tox IgM(035099X)、Rub IgG( 036078 X/l),Rub IgM (037099X/1), CMV IgG (161024X), CMV IgM(167017X/l)、HSV IgG(075061X/l)、HSV IgM(077058X)及质控品批号（包括低值、高值2个水 平）Tox IgG(8370310、8380310)、Tox IgM(5380320、 5610320 )、Rub IgG ( 5180330、5550330 )、Rub IgM (5190330、5560330)、CMV IgG (1640060、1650060)、 CMVIgM ( 2520080、2530080 )、HSV IgG ( 6680320、 6690320)、HSV IgM(6720320、6860350)。1.3方法

1.3.1准确度验证参加2015年国际室间质评计 划（RIQAS)，提供的室间质量评价材料（一般为5份） 进行1次测定，其测定结果与回报靶值及可接受限进 行比对以RIQAS国际室间质评结果为依据，成绩在 80 %以上者即为验证通过。

1.3.2 精密度验证根据NCCLS-EP5-A2和美国 临床实验室标准化协会（CLSDEP15-A2文件进行精 密度验证。批内精密度检测按照临床标本相同的检 测方法，同批次内检测相同的20份混合的新鲜临床 标本。记录结果并计算均值(Y)、标准差G)和批内变 异系数C V ( % );批间精密度检测将室内质控标本连 续检测20 d。记录结果并计算王、5和批间精密度CV (%)。计算批内和批间精密度的及变异系数CV (%)，计算结果必须符合NCCLS文件的标准，即批内

和回归方程式 y=aX+b。；r2>0. 95，a 在0. 97〜1.03 判断为线性范围验证通过。

1.3.4生物参考区间验证收集20例健康人血清 标本及时检测，要求其年龄性别等均匀分布。计算出 比率(R)>95 %的标本结果位于生物参考区间内为验 证通过。

-\\/ 1 AA 0/

总参考个体数

1.3.5可报告范围验证采用高值样品，按1:2、 1 : 4、1 : 8、1 : 10进行稀释，样品原倍均值结果作为 样品的预期值，将样品进行稀释后得出的结果为检测值计算出偏差（S)。评价标准为一20%2 结

果

2.1准确度验证结果2015年RIQAS国际室间质 评提供的室间质量评价材料批号201521〜201525的 反馈结果依次为Tox IgG( +、一、一、一、一）、Tox IgM (―、+、一、一、一、）、Rub IgG ( +、一、一、一、 + )、Rub IgM( —、一、一、一、+ )、CMV IgG(—、一、 —、+、一）、CMV IgM( —、一、一、+、一）、HSV IgG (+、一、一、+、+ )、HSV IgM( —、一、一、一、+ )检测 结果的阴阳性与LIAISON化学发光免疫分析仪检测 结果阴阳性均一致，LIAISON化学发光免疫分析仪 检验项目准确度的验证结果与质评反馈结果符合率 为2.2 100%，检验项目准确度的验证结果均为合格。精密度验证结果批内不精密度CV值在3. 58%〜7. 03 %均小于规定的范围；批间不精密度 CV 值在 3. 13%〜10.73%。见表 1。

2.3线性范围验证结果对索灵化学发光免疫分析 仪检测TORCH的分析范围进行评价，T〇x IgG、T〇xIgM,Rub IgG,Rub IgMXMV IgGXMV IgM,HSV IgG、HSV IgM线性范围验证回归系数a值分别为0• 980 5、0.984 4、0. 977 7、0. 973 1、0. 961 7、0. 990 4、 0• 997 4、0. 996 l;r2 值为 0• 997 5、0. 996 9、0. 997 1、0.998 6、0. 996 1、0. 997 3、0. 997 4、0. 997 9。以 CMV IgGXMV IgM线性统计结果为例，CMV IgG、 CMV IgM线性符合EP6-A2和EP7-A2文件的要求， 见表2、3及图1、2。

国际检验医学杂志 201S年1 月第39卷第2期 IntJ LabMed,Jaiiuary201S,Vol.39,No.2• 151 •

表1

批内精密度

项目Tox IgMTox IgGRub IgMRub IgGCMV IgM16334317997263173200

S

精密度验证

批间精密度度

IgG、HSV IgM、HSV IgG的生物参考区间分别为3〜8 AU/mL、3 〜8. 8 IU/mL、10 〜25 AU/mL、5 〜11 IU/mL、5 〜22 U/mL、5 〜14： U/mL、0• 5 〜1. 1 In­dex、!). 5 〜1 • 1 Index。以 Tox IgG、Tox IgM 检测为

批内 CV( ?'•〇■.)

703493661482358396X

340765842759

S

批间

cvoi)

115213660304115603

2942092

298302227

313875459335823335例，生物参考区间验证结果见表4、5。

表4

标本号1Tox IgM生物参考区间验证（AU/mL)检测结果3. 46标本号11检测结果4. 571393546714257477CMV IgG15222

HSV IgM1960126340680071073HSV IgG

895035

386

307

024

792

表2

CMV IgG线性统计结果（U/mL)

编号第i次第2次均值理论值15. 15. 65. 45. 9246. 248. 947. 646. 7379. 885. 682. 787. 54121. 4131. 6126. 5128. 25

174. 8

179. 3

177. 1

169. 0

表3

CMV IgM线性统计结果（U/mL)

编号 第1次 第2次 均值 理论值18671797423763933854123738678708750410501048104910885

1427

1469

1448

1426

2.4生物参考区间验证 8项检测的生物参考区间

均在厂商提供的生物参考区间的范围之内即Tox

IgM、T〇x IgG、Rub IgM、Rub IgGXMV IgMXMV

23. 67126. 2434. 57135. 1845. 78144. 2753. 59154. 246

4. 29163. 4574. 58175. 2583. 63184. 2395. 38193. 7410

4. 32

20

5. 46

表5

Tox IgG生物参考区间验证（IU/mL)标本号

检测结果标本号检测结果13. 43113. 6523. 56123. 8934. 35134. 2945. 98145. 3753. 75153. 9865. 78164. 5874. 35173. 8985. 35184. 9294. 25195. 3910

4. 78

20

3. 75

3讨 论

LIAISON化学发光免疫分析仪检测TORCH采

用超顺磁微粒的固相载体，用化学发光法进行检

测[s]。LIAISON闪烁化学发光是基于异鲁米诺衍生 物（ABEI)，它作为标记物结合在抗体或抗原表面，反 应由激发液触发。本反应完全在封闭系统内进行。 根据仪器说明书提示，说明书上提供的参数都是厂家 在最佳条件下完成的，这与本科室的水质、电压的稳 定性，实验室环境温湿度，实验室人员的操作等实际 外部条件均存在差异。因此，本科室对LIAISON上 开展的TORCH共8个项目进行了方法学性能验证。

准确度验证中通过RIQAS国际室间质评，其测 定结果与回报靶值及可接受限进行比对以RIQAS国 际室间质评结果为依据，LIAISON化学发光免疫分 析仪检验项目准确度的验证结果与质评反馈结果符 合率为100%。表明检测系统准确度的性能符合要 求，准确度高。

精密度是免疫定量测定中最基本的性能指标，反 应检测结果的重复性。EP5-A2要求对仪器进行精密

度验证，从而客观的评价仪器的工作性能。根据美国

临床实验室室间质量评估误差表中评价项目的允许 误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不 精密度小于允许误差的1/4和1/3作为检测系统不

• 152 •

国际检验医学杂志2018年1月第39卷第2期 Int J Lab Med January 2018，V〇1. 39，No. 2

精密度性能的可接受标准，且又小于厂商提供的精密 度[M4]。本文测定的TORCH 8项结果的批内不精密 度CV值在3. 58%〜7. 03%，均小于规定的范围，即 批内CV值均小于1/4最低质量标准。批间不精密度 CV值在3. 13%〜10. 73%，符合批间CV值均小于1/ 3最低质量标准，均符合厂商要求。说明仪器重复性 好，结果稳定。

据文献[15]所述标本中物质的浓度在检测线性 范围时，所测的结果均是可信的，即更接近被测物质 的真实值。临床检验中心在生产厂家进行检定校准 分析检测系统时，对厂家的线性范围进行了验证，验 mation using patient samples: EP9-A2[S]. Wayne，PA， USA：NCCLS,2002.

[2] NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORA­

TORY STANDARDS. Evaluation of precision perform­ance of quantitative measurement methods ： EP5-A2 [ S]. Wayne, PA, USA ： NCCLS, 2004.

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TUTE. User verification of performance for precision and trueness ： EP15-A2[S]. Wayne, PA, USA ： CLSI ,2005.[4] NATIONAL COMMITTEE FOR CLINICAL LABORA­

TORY STANDARDS. Evaluation of the linearity of quan­titative measurement procedures： EP6-A2 [S]. Wayne, 证结果与厂家提供的线性范围一致。本文对索灵化 学发光免疫分析仪检测torch的分析范围进行评 价，Tox IgG、T〇x IgM、Rub IgG、Rub IgM、CMV IgG、CMV IgM、HSV IgG、HSV IgM 线性范围验证 回归系数a值分别为0• 980 5、0• 984 4、0• 977 7、 0• 973 1、0. 961 7、0. 990 4、0. 997 4、0. 996 l;r2 值为0. 997 5、0. 996 9、0. 997 1、0. 998 6、0. 996 1、0. 997 3、0. 997 4、(). 997 9均大于0. 95,线性均符合要求，默认 厂家提供的线性范围为实验室的可报告范围。

根据试剂说明书提示，每个实验室都要建立自己 的生物参考区间，而实际情况中实验室验证采用厂商 提供的生物参考区间的居多。本研究严格按照 NCLLS EP-P2文件和文献[16]的要求，生物参考区 间进行实验前必须对检测系统进行性能评价。主要 为精密度和准确度是否符合临床要求。在检测系统 在控状态下检测实验标本，记录实验数据。健康参考 个体选择要求；根据文献和实验研究，总结该项目检 验结果产生生物变异和分析干扰的因素，确定参考个 体的选择原则[17]。个体来源于体检中心不同性别，年 龄自愿体检者。验证结果，根据计算，R值均为 100%，根据验证要求，R>95%即为验证通过。8项 检测的生物参考区间均在厂商提供的生物参考区间 的范围之内即 T〇x IgM、T〇x IgG、Rub IgM、Rub IgGXMV IgM、CMV IgG、HSV IgM、HSV IgG 的 生物参考区间分别为3〜8 AU/mL、3〜8. 8 IU/mL、 10〜25 AU/mL、5〜11 IU/mL、5 〜22 U/mL、5〜14： U/mL、0. 5〜1. 1 Index、0• 5〜1. 1 Index,因此，本实 验室采用试剂厂家提供的生物参考区间。

综上所述，本研究对索灵化学发光免疫分析仪厂 家提供的TORCH检测的精密度、准确度、线性范围 和可报告范围、生物参考区间的验证，为临床提供了 准确、可靠的依据，精密度、线性范围、准确度、携带污 染率及参考范围的测定参数均符合该仪器技术要求。

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(收稿日期：2017-06-11 修回日期：2017-09-29)

法

光