一株哈茨木霉及其应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 107245456 A(43)申请公布日 2017.10.13

(21)申请号 201710495758.0(22)申请日 2017.06.26(83)生物保藏信息

CGMCC No.13764 2017.03.17

(71)申请人 中国科学院微生物研究所

地址 100101 北京市朝阳区北辰西路1号院

3号(72)发明人 仲乃琴　刘宁　赵盼　钞亚鹏　

赵东　(74)专利代理机构 北京律和信知识产权代理事

务所(普通合伙) 11446

代理人 项荣　刘国伟(51)Int.Cl.

C12N 1/14(2006.01)C12N 1/20(2006.01)

(54)发明名称

一株哈茨木霉及其应用(57)摘要

本发明公开了一株哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001，已于2017年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.13764。本发明的禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂可以快速去除臭味，缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。

C12N 1/18(2006.01)C05F 17/00(2006.01)C05G 3/00(2006.01)C12R 1/885(2006.01)C12R 1/125(2006.01)C12R 1/865(2006.01)C12R 1/69(2006.01)C12R 1/01(2006.01)

权利要求书1页 说明书3页

CN 107245456 ACN 107245456 A

权　利　要　求　书

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1.一株哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001 CGMCC No.13764。2.一种禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂，活性成分为哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001 CGMCC No.13764。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂包括：哈茨木霉lzz-001、戊糖片球菌、枯草芽孢杆菌、米曲霉、酿酒酵母，其质量比为：4:3:1:1:1。

4.根据权利要求2或3所述的菌剂在腐熟禽畜粪便中的应用。5.一种禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂的制备方法，其特征在于，包括：(1)将哈茨木霉lzz-001接种于9cm的PDA培养基平板中，待木霉长满平板后。(2)将长满木霉的平板切块，大小0.5cm*0.5cm，接种与液体PDA培养基中，350ml接种2块。27℃培养3d。

(3)将麦麸加水，湿度20％，121℃灭菌20min。(4)350ml接种到6kg固体培养基上，27℃暗培养7d。(5)将发酵好的木霉菌剂40℃烘干，水分15％以下，烘干后将菌剂粉碎。(6)将五种菌按质量比：哈茨木霉lzz-001 4：枯草芽孢杆菌3：戊糖片球菌1：米曲霉1：酿酒酵母1，混合均匀。

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CN 107245456 A

说　明　书一株哈茨木霉及其应用

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技术领域

[0001]本发明属于微生物发酵技术领域，尤其涉及禽畜粪便复合微生物腐熟技术领域。背景技术

[0002]随着养殖业数量的增多和生产规模的不断扩大，畜禽粪便的排放量也随之提高，大量的畜禽粪便如果不经处理就排放到环境中，不仅污染了环境，而且也会导致病原菌的扩散，严重危害了畜禽和人类的健康。因此，需要利用微生物技术对畜禽粪便进行处理并消灭病原菌的扩散。

发明内容

[0003]本发明的第一目的是提供一株哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001，已于2017年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.13764。[0004]本发明所提供的哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001 CGMCC No.13764：[0005](1)菌种获得[0006]1)、将从山东采集的秸秆腐熟样品在PDA培养基上进行稀释分离培养。[0007]2)、将分离培养基上生长较快的一株纯化到新的PDA培养基上。[0008]3)、利用28s rDNA序列进行分子鉴定，鉴定为哈茨木霉菌，编号为lzz-001。[0009](2)菌株功能鉴定[0010]1)、从市面上购买其它公司的哈茨木霉菌与分离的哈茨木霉菌lzz-001分别与其它菌剂按比例混合。[0011]2)、将制得的混合菌剂进行秸秆腐熟，发现含有分离的哈茨木霉菌lzz-001的效率更高。

[0012]本发明的第二目的提供一种禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂，活性成分为哈茨木霉(Trichodema harzianum)lzz-001 CGMCC No.13764，包括：哈茨木霉lzz-001、戊糖片球菌、枯草芽孢杆菌、米曲霉、酿酒酵母，其质量比为：4:3:1:1:1。[0013]其中，孢子含量分别是≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。

[0014]本发明的第三目的是提供了一种禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂的制备方法，包括：[0015](1)将哈茨木霉lzz-001接种于9cm的PDA培养基平板中，待木霉长满平板后。[0016](2)将长满木霉的平板切块，大小0.5cm*0.5cm，接种与液体PDA培养基中，350ml接种2块。27℃培养3d，作为液体种备用。[0017](3)将麦麸加水，湿度20％，121℃灭菌20min。作为固体培养基。[0018](4)350ml接种到6kg固体培养基上，27℃暗培养7d。[0019](5)将发酵好的木霉菌剂40℃烘干，水分15％以下，烘干后将菌剂粉碎。

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CN 107245456 A[0020]

说　明　书

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(6)复合微生物腐熟菌剂孢子含量分别是≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克

的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0021](7)五种菌：≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0022](8)将五种粉剂菌剂按质量比：哈茨木霉4：枯草芽孢杆菌3：戊糖片球菌1：米曲霉1：酿酒酵母1，混合均匀。

[0023]本发明的禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂可以快速去除臭味，缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。具体实施方式：

[0024]现结合具体实施方式和实施例说明本发明，但发明不限于以下内容。

[0025]本发明公开的复合微生物菌剂是由以保藏号为13764的哈茨木霉lzz-001，配以戊糖片球菌、枯草芽孢杆菌、米曲霉、酿酒酵母复配而成。孢子含量分别是≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。按重量百分比分别是哈茨木霉40％，枯草芽孢杆菌30％，戊糖片球菌10％，米曲霉10％，酿酒酵母10％。

[0026]本发明提供了一种禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂的生产方法，所述方法包括：[0027](1)将哈茨木霉lzz-001接种于9cm的PDA培养基平板中，待木霉长满平板后。[0028](2)将长满木霉的平板切块，大小0.5cm*0.5cm，接种与液体PDA培养基中，350ml接种2块。27℃培养3d，作为液体种备用。[0029](3)将麦麸加水，湿度20％，121℃灭菌20min。作为固体培养基。[0030](4)350ml接种到6kg固体培养基上，27℃暗培养7d。[0031](5)将发酵好的木霉菌剂40℃烘干，水分15％以下，烘干后将菌剂粉碎。[0032](6)复合微生物腐熟菌剂孢子含量分别是≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0033](7)五种菌剂分别是：≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0034](8)将五种粉剂菌剂按重量比哈茨木霉40％，枯草芽孢杆菌30％，戊糖片球菌10％，米曲霉10％，酿酒酵母10％混合均匀。

[0035]本发明的禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂可以快速去除臭味，缩短发酵时间，腐熟的有机肥可以提高肥力，减少病虫害。[0036]实施例1：

[0037]禽畜粪便复合微生物腐熟菌剂的制备：[0038](1)将哈茨木霉lzz-001接种于9cm的PDA培养基平板中，待木霉长满平板后。[0039](2)将长满木霉的平板切块，大小0.5cm*0.5cm，接种与液体PDA培养基中，350ml接种2块。27℃培养3d，作为液体种备用。[0040](3)将麦麸加水，湿度20％，121℃灭菌20min。作为固体培养基。

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CN 107245456 A[0041]

说　明　书

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(4)350ml接种到6kg固体培养基上，27℃暗培养7d。检测孢子含量≥100亿/克后停

止发酵。[0042](5)将发酵好的木霉菌剂40℃烘干，水分15％以下，烘干后将菌剂粉碎。[0043](6)复合微生物腐熟菌剂孢子含量分别是≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0044](7)五种菌剂分别是：≥100亿/克的哈茨木霉菌；≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母。[0045](8)本实施例中的≥200亿/克的戊糖片球菌；≥1000亿/克的枯草芽孢杆菌；≥100亿/克的米曲霉；≥200亿/克的酿酒酵母均由慕恩(北京)生物科技有限公司提供。[0046](9)将五种粉剂菌剂按重量比哈茨木霉40％，枯草芽孢杆菌30％，戊糖片球菌10％，米曲霉10％，酿酒酵母10％混合均匀。[0047]实施例2：[0048]用实施例1中的复合菌剂进行猪粪腐熟。地点江西镇江，3月份。[0049]1、将1公斤菌剂与2吨猪粪(添加20％的秸秆混匀)混合，控制湿度在60％左右。作为实验组。将2吨猪粪(添加20％的秸秆混匀)控制湿度在60％左右，作为对照组。[0050]2、将实验组和对照组分别直接在地面堆制，一般堆成梯形，高不超过1.5米，堆底宽不超过5米。

[0051]实验组比对照组升温早而快，发酵腐熟时间缩短33％。

[0052]

实验组对照组

[0053]

升温时间13h22h降温时间8d16d发酵完成时间22d33d

实施例3：

[0054]用实施例1中的复合菌剂进行羊粪腐熟。地点江西镇江，3月份。[0055]1、将1公斤菌剂与2吨羊粪(添加20％的鸡粪混匀)混合，控制湿度在60％左右。作为实验组。将2吨羊粪(添加20％的鸡粪混匀)控制湿度在60％左右，作为对照组。[0056]2、将实验组和对照组分别直接在地面堆制，一般堆成梯形，高不超过1.5米，堆底宽不超过5米。

[0057]实验组比对照组升温早而快，发酵腐熟时间缩短34％。

[0058]

实验组对照组升温时间10h21h降温时间6d14d发酵完成时间21d32d

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