６０ ・Ｗｍ’ｌｄ Ｌａｌｅｓｔ Ｍｅｄｉｃｎｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｖｅｒｓｉｏｎ）２０ １ ７ Ｖｏ １．１ ７ Ｎｏ．５ 药物与临床・ 氦基糖苷类修饰酶基因ａａｄＣ型在耐药金黄色葡萄球菌中流行 张楚义，朱琳琦，陈蠡， 岁舒心，沈佧慧，沈沩 （丽水 院，淅汀 丽水３２３０００） 摘 要：目的调查一组耐药金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制。方法收集２０１２年至２０１４年浙江省丽水市 中心医院住院患者标本中分离到的金黄色葡萄球菌共７８株，经法国生物梅里埃公司（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）Ｖｉｔｅｋ６０细菌鉴定仪鉴定 为金黄色葡萄球菌，再用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法分析氨基糖苷类修饰酶基因ａａｄＣ。结果本组７８株耐药金黄色葡萄球 菌中检出氨基糖苷类修饰酶基因ａａｄＣ的菌株有５９株（７５．６％）。结论产氨基糖苷类修饰酶基因ａａｄＣ是本组耐药金黄色 葡萄球菌对氨基糖苷类抗生素耐药的重要原因。国内首次报道在金黄色葡萄球菌临床分离株中检出ａａｄＣ型氨基糖苷类修饰 酶基因。 关键词：金黄色葡萄球菌；氯基糖苷类抗生素；氧基糖苷类修饰酶基因；耐药 中图分类号：Ｒ３７８．１＋ｌ 文献标识码：Ｂ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．Ｉ６７１—３１４Ｉ．２０１ ７．５．０５０ ０ 弓Ｉ言 ＢＬＡＳＴ，结果证实为ａａｄＣ基区】序列。 金黄色衙萄球菌广泛分布于自然界，人和动物是主要的 表１ １７８株耐药金黄色葡萄球菌药敏检测结果［株（％）】 带菌者。近年米由于滥用抗生素，耐药菌株迅速增多。自２０ 世纪６０年代 欧美首先发现丁耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 （ＭＲＳＡ）医院感染以来，耐甲氧 林金黄色葡萄球菌感染的 比例越来越离，已成为引起医院感染重要的致病菌之一…。金 黄色葡萄球菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制主要是产生氨基 糖什类钝化酶。 １材料与方法 １．１材料 、 １．１．１ 株米源、 种分子鉴定：小组７８株菌均分离自２０１２ 表２ ７８株金黄色葡萄球菌耐药性与ａａｄＣ相关性分析 年至２０１４年浙江省丽水市中心医院住院患者，其中痰标本４７份、 脓液ＩＯ份、ｌ０ｌ液１份、渗 液ｌ７份、脑脊液３份。法国生物 梅里埃公・ （ｂｉｏＭｅ，ｉｅｔ－ｘ）Ｖｉｌｅｋ６０细菌鉴定仪鉴定为金黄色葡 绚球菌 １．１．２抗 药物 培养基为杭州滨和微牛物试剂有限公司产 １．１．３丰 刺Ｉ）ＣＲ反应所需试剂ｆＩ１５Ｊ Ｉ 海捷瑞生物１‘ 程有限 公ｒ １．２方法、 １．２．１ 药敏试验：采用ＭＩＣ法，对所有金黄色葡萄球菌临床分 离株及质控菌株做７种氨基糖苷类抗生素药敏试验，包括卡那 ３讨论 霉素、大观霉素、妥布霉素、庆大霉素、链霉素、核糖霉素和 本实验研究ａａｄＣ与细菌刈‘７种氨基糖苷类抗生素耐药 阿米卡星。并彬据美国ＣＬＳＩ２０１ １年版标准进行抗菌药物敏感 的关系。结果５８株卡那霉素耐药菌株中有５０株含有ａａｄＣ， 性判断。 ８株未检测到，检出率达８４．７％，１８株阿米卡星耐药株中有 １．２．２模板ＤＮＡ制备：将各临床分离株及质控菌株接种于普通 琼脂平板，置３７ ｑ【：培养１８ｈ，取单菌落置入１．５ｍＬ的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ １２株含有ａａｄＣ，检 率为２０．３３％；４７株阿米卡 敏感株检Ｈ｛ 离心管内（内顶置生理盐水４００ Ｌ），混匀，ｌＯ０００ｒ／ｍｉｎ离 ａａｄＣ。由于病原菌耐药特征的复杂性，无法将实验孤 考虑， 心５ｍｉｎ；弃㈦青，加人３００ １双蒸水，混匀，煮沸１００℃， 细菌往往对多种氨基糖苷类药物交义耐药。细菌对链霉素耐药 １５ｒａｉｎ；１２０００ｆｆｍｉｎ离心２ｒａｉｎ； 清液为ＤＮＡ模板，一２０ 冰箱 率达８９．７％．且在敏感菌株中检 率较高，检 率为７８．９％， 保存备用。 说明ａａｄＣ与病原菌对链霉素耐药无明显相关。 １．２．３ ａａｄＣ引物合成：由上海桑尼生物科技有限公司合成。 参考文献 ２ 结果 ［１］ 张庆玲，刘明华，王仙园．耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究进展 ２．１药敏结果。表１～２。 ［Ｊ］．中华医院感染学杂志，２００２，１ ２（１Ｏ）：７９７－７９８． ［２］Ｚｈａｎｅｌ Ｇ Ｇ，Ｌａｗｓｏｎ Ｃ Ｄ．Ｚｅｌｅｎｉｔｓｋｙ Ｓ．ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆｔｈｅ ２．２ ＰＣＲ扩增结果。金黄色葡萄球菌质控菌株（ＡＴＣＣ２５９２３）未 ｎｅｘｔ—ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｐｌａｚｏｍｉｃｉｎ ｔｏ ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ， 扩增到ａａ（ｔＣ特异性片段，７８株临床分离株中有４０株检出ａａｄＣ。 ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ ａｎｄ ａｍｉｋａｃｉｎ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒ ｅｖ．Ａｎｔｉ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒ．． ２．３ ＤＮＡ测序分析。将ＰＣＲ扩增得到特异性片段克隆测 ２０１ ２，１０（４）：４５９—４７３． 序，得到片段长Ｊｌ叟＝为４４１ｂｐ。经ＮＣＢＩ检索，与已知序列进行 应用，２０１ ２，９：１８５－１ ９２一 析［Ｊ］．中国药业，２０１ ３，１７：４７－５３． ［３］郑万有．高血压病的研究进展和临床合理用药［Ｊ］．天津药学，２０１２（４ｌ ［５］ 曾繁涛，谢杰．抗高血压药物临床用药分析［Ｊ］．现代医药卫生 ［４］郑玲利．袁明勇，李燕，等．２０１１—２０１ ２年我院抗高血压药物用药分 ２０１２．２３（１ ５）：２２２６－２２２７．
