非结核分枝杆菌病实验室诊断方法分析及临床应用

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（）文章编号：００７－４２８７２０１９０６－０９３５－０５１

非结核分枝杆菌病实验室诊断方法分析及临床应用

王凤平１，徐俊驰１，欧萌萌２，方斌斌２，吕　珏３＊陈　蕾１，

（苏州市第五人民医院检验中心，南京医科大学附属无锡精神卫生中心，江苏无锡２江苏苏州２１５００７；２．１４００２；１．

）无锡市第二人民医院，江苏无锡２１４００２３．

摘要：目的　通过非分枝杆菌病例分析，评价结核病实验技术在ＮＴＭ病诊断临床应用。方法　从痰抗酸涂片、结核蛋白芯片、对１和３患者ＴＢＧＲＡ、ＴＢＮＡ及菌种耐药情况，９４例非分枝杆菌感染（ＮＴＭ）１８例肺结核（Ｂ）ＩＭＴ－－Ｄ结核蛋白芯片阳性率分别经统计学分析，两者显示无统计学意义（结果分析。结果　①ＮＴＭ组与ＭＴＢ组痰涂片、Ｐ）。Ｔ。②经统计学分析有显著性差异（０５ＢＧＲＡ在ＮＴＭ组与ＭＴＢ组阳性率分别１９．６％、８５．５％，０１）ＩＰ＜０．＞０．－，。③临床分离经Ｄ阴性预测值（ＢＧＲＡ检测在ＮＴＭ涂阳组敏感度最低（１７．４％）７．４％）ＮＡ微阵列芯片法菌种１ＩＴ－鉴定１链霉素耐药率最高达１异烟肼耐药率９．利福平耐９３株结核分枝杆菌复合群对常用抗结核耐药情况，４％、８％、对常用一线抗结核药物均显示高度耐药。结论　痰抗酸药率６．２％；５种４５株ＮＴＭ主要是胞内和堪萨斯分枝杆菌，对疑似涂片、结核蛋白芯片在早期筛查肺结核病时有一定临床应用价值，但在ＮＴＭ和ＭＴＢ感染均可显示阳性反应，尤其是痰抗酸涂片阳性而ＴＮＴＭ感染无法鉴别诊断。ＴＢＧＲＡ在ＮＴＭ组有较好的阴性预测值，ＢＧＲＡ阴性疑似ＩＩ－－给临床提供早期诊断依据。肺结核患者，应充分考虑ＮＴＭ感染，

关键词：非分枝杆菌病；阴性预测值；鉴别诊断ＴＢＧＲＡ；Ｉ－中图分类号：４４６Ｒ

文献标识码：Ａ

ｌｉｎｉｃａｌａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｌａｂｏｒａｔｏｒｔｅｃｈｎｏｌｏｉｎｔｈｅｄｉａｎｏｓｉｓｏｆｎｏｎｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｃｏｂａｃｔｅｒｉａｄｉｓｅａｓｅｔＣ　　　　　　　　　　　ＣＨＥＮ－ｐｐｙｇｙｇｙ　　

１１１，，（ＬｅｉｉｅｎｎＥ　ｕｎ－ｈｉｔｌ．ｌｉｎｉｃａｌａｂｏｒａｔｏｒｈｅｉｔｈ　ｅｏｌｅ’ｏｓｉｔａｌｕｚｈｏｕ，ＷＡＮＧ　ＦＸＵＪｃｅａ１．ＣＬｔＦＰｓ　ＨｏＳ　　　　ｐｇ－ｇ，ｙ，ｆｐｐｆ　

ｕｚｈｏｕ２１５００７，ｈｉｎａ；ｈｅｕｘｉ　ｅｎｔａｌ　ｅａｌｔｈ　ｅｎｔｅｒａｎｉｎｅｄｉｃａｌｎｉｖｅｒｓｉｔｕｘｉ１４００２，ｉｌｉａｔｅｄ　ＳＣ２．ＴＡＷＭＨＣｏＮＭＵＷ２　　　　ｊｇ　ｙ，ｆｆｆ　’ｈｉｎａ；ｕｘｉ　ｏ．ｅｏｌｅｏｓｉｔａｌ，ｕｘｉ１４００２，ｈｉｎａ）３．２ＣＷＮ２Ｐｓ　ＨＷＣ　　ｐｐ：ｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｌａｂｏｒａｔｏｒｔｅｃｈｎｏｌｏｉｎｔｈｅｄｉａｎｏｓｉｓｏｆＡ　Ｔ　　　　　　　　　　ｐｐｙｇｙｇｊ　　ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｃｏｂａｃｔｅｒｉａ（ＮＴＭ）ｄｉｓｅａｓｅｂａｎａｌｚｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｃａｓｅｓｏｆＮＴＭｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓｎａｌｚｅｔｈｅ－　　　　　　　　Ａ　ｙｙｙｇｙ　　

，ｈｉｃｈｔｅｓｔｅｄｂｓｕｔｕｍａｃｉｄｒｅｓｕｌｔｓｏｆ１９４ｃａｓｅｓｏｆＮＴＭａｎｄ３１８ｃａｓｅｓｏｆＭｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴＢ）ｗ　　　　　　　　　　　ｙｐｙ　，，ＧＲＡ，ＴＢＮＡａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｒｅｓｉｓｔａｎｔ．ＲｅｓｕｌｔｓｎａｌｚｉｎｔｈｅｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆｓｍｅａｒｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｃｈｉＴＢＩ　　　　①Ａ　　　　　－－Ｄｙｇｐｐｐ　，ｓｕｔｕｍａｃｉｄｓｍｅａｒａｎｄｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｃｈｉｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｉｎＮＴＭｒｏｕａｎｄＭＴＢｒｏｕｉｔｓｈｏｗｅｄｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｙｇｐｇｐ　　　，ｓｉｎｉｆｉｃａｎｃｅ（０５）．ＨｏｗｅｖｅｒｔｈｅｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆＴＢＧＲＡｉｎＮＴＭｒｏｕａｎｄＭＴＢｒｏｕｗｅｒｅ８５．５％ａｎｄＰ＞０．Ｉ　　　　　　　　　　－ｇｐｇｐｇｐ　　，）１９．６％ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（０１．ＢＧＲＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｄｅｘｉｎＮＴＭｓｍｅａｒｏｓｉＰ＜０．Ｉ　　　②Ｔ　　　　　　－－ｐｙｇｐ，ｉｖｅｒｏｕｈａｄｔｈｅｌｏｗｅｓｔｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔ１７．４％）ｎｄｉｔｓｎｅａｔｉｖｅｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅｗａｓ１７．４％．ｎａｌｚｉｎｔｈｅｓｉｔｕａｔｉｏｎｔａ　　　　　　　　　　③Ａ　ｇｐｙ（ｇｐｙｇ　　ｏｆｃｏｍｍｏｎａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆ１９３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＭｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｃｏｍｌｅｘｒｏｕｓｗｈｉｃｈｗｅｒｅ　　　　　　　　　　　　　ｇｙｐｇｐ　，ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｍｅｔｈｏｄｉｔｃｏｕｌｄｂｅｆｉｎｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｏｆｓｔｒｅｔｏｍｃｉｎ　　　　　　　　　　　　　　ｙｙｐｙ　　，ｗａｓ１４％ｗｈｉｃｈｗａｓｔｈｅｈｉｈｅｓｔｏｆＩｓｏｎｉａｚｉｄｗａｓ９．８％ａｎｄｏｆｒｉｆａｍｉｎｗａｓ６．２％．４５ｓｔｒａｉｎｓｏｆ５ｓｅｃｉｅｓｏｆＮＴＭ　　　　　　　　　　　　　　　ｇｐｐ，ｗｅｒｅｍａｎｌｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｋａｎｓａｓｉｉｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｈｉｈｌｒｅｓｉｓｔａｎｔａａｉｎｓｔｆｉｒｓｔｉｎｅａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｌ　　　　　　　　　　－ｙｙｇｙｇ　　ｄｒｕｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓｕｔｕｍａｃｉｄｆａｓｔｓｍｅａｒａｎｄｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｃｈｉｈａｖｅｃｅｒｔａｉｎｃｌｉｎｉｃａｌａｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅｉｎｔｈｅ　　　　　　　　　　　　　ｇｐｐｐｐｐ　，ｅａｒｌｓｃｒｅｅｎｉｎｏｆｕｌｍｏｎａｒｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．ＢｕｔｉｎｔｈｅＮＴＭａｎｄＭＴＢｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍａｄｉｓｌａｂｏｔｈｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｓ　　　　　　　　　　ｙｇｐｙｙｐｙｐ　　　　　ＧＲＡｉｎＮＴＭｒｏｕｈａｓｂｅｔｔｅｒｗｈｉｃｈｍｅａｎｓｔｈｅａｒｅｕｎａｂｌｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｓｕｓｅｃｔｅｄＮＴＭｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＴＢＩ　　　　　　　　　　　　　－ｇｐｙｙｐ　　　’，ｎｅａｔｉｖｅｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅ．ＷｈｅｎｓｏｍｅｏｎｅｓｒｅｓｕｌｔｏｆｓｕｔｕｍａｃｉｄｆａｓｔｓｍｅａｒｉｓｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｏｆＴＢＩＧＲＡｉｓｎｅａｔｉｖｅ　　　　　　　　　　　　　　－　　ｇｐｐｐｇＧＲＡｃａｎｒｏｖｉｄｅｃｌｉｎｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｅａｒｌｄｉａｎｏｓｉｓｏｆｎｏｎｕＩｔＮＴＭｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ．ＴｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＴＢ　　　　　　　　－－－　　　　　　　ｐｙｇ　ｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｃｏｂａｃｔｅｒｉａｄｉｓｅａｓｅ．　　ｙ

；；：ｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｃｏｂａｃｔｅｒｉａｄｉｓｅａｓｅＴＢＧＲＡ；ｎｅａｔｉｖｅｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉａｎｏｓｉｓｔＩＫｅｗｏｒｄｓｎｏｎ　　　　　－－ｙｇｐｇｙ　

（）ＣＪ　ＬＤ２ｈｉｎａｂ　ｉａｎ，０１９，２３：０９３５　ｇ，江苏省自然科学基金面上项目（基金项目：苏州市科ＢＫ２０１６１２３０）

，无锡市卫生学技术局资助项目（ＺＳ２０１４１２、ＳＳ２０１６５７）Ｓ）计生委资助项目（Ｑ２０１７５５

＊通讯作者

是分枝杆菌属内不包ＮＴＭ）　　非结核分枝杆菌（

括ＭＴＢ复合群和麻风分杆菌以外的其它分枝杆

［］菌，到现在共发现１主５４种ＮＴＭ和１３个亚种１，

—９６—３

，ＣＮｈｉｎＪＬａｂＤｉａｎ，Ｊｕｎｅ２０１９，Ｖｏｌ２３，ｏ．６　　　　ｇ要为腐物寄生菌，少部分对人体致病。可侵犯人体肺部、泌尿系统、淋巴结、皮肤及软组织等组织器官，可引起全身播散性感染。２０１２年非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识指出，ＮＴＭ病呈快速增多趋势，成为威胁人类健康的公共卫生问题。非结核分枝杆菌病临床表现、受累组织病理改变、胸部影像（与肺结核十分相似，临床将ＮＴＭ感染Ｘ线／ＣＴ）

误诊为结核病诊治屡见报道，且ＮＴＭ对临床常用

２，３］

。如一、二线抗结核药天然耐药，造成久治不愈［

临床分离培养阳性株用于提取分枝杆菌ＤＮＡ行

选用北京博奥生物有限公司结核分ＰＣＲ扩增检测，枝杆菌解决方案，包含检测仪器、结核分枝杆菌菌种鉴定试剂盒。从分离株样本ＤＮＡ检测试剂盒、

采集、核酸提取、芯片杂交、芯片扫描及ＰＣＲ扩增、结果判读，均严格按照实验操作说明进行；以阴性、阳性质控品和阳性定量参考品的Ｃｔ值作为参考判定。比例法罗氏药物敏感试验每批均以结核分枝杆（菌标准减毒株Ｈ进行质控，所有３７ＲａＡＴＣ２５１７７）

、《实验操作均按照《结核病诊断实验室检验规程》江苏省临床基因扩增检验技术管理规范》要求进行，实验人员均具有中级以上职称并通过江苏省分子诊断实验技术培训。

１．３　血液标本检测方法　疑似患者留取痰液标本

后一周内采集血液标本，采集一管肝素锂抗凝鲜全血５ｍ用于γ－干扰素体外释放ｌ用并于２ｈ内送检，另一管分离胶血清管用于结试验（检测，ＴＩＢＧＲＡ）－核抗体蛋白芯片检测。ＴＢＧＲＡ检测使用北京万Ｉ－泰生物技术有限公司生产的γ－干扰素体外释放试验检测试剂盒，结核抗体蛋白芯片为南京大渊生物技术工程有限责任公司偍供的试剂盒，均严格按照说明书操作。

１．４　统计学方法　收集资料用ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计学分析，应用灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值评估上述结核实验室检测方法的诊断效

２能，率的比较采用χ检验，０５为差异有统计Ｐ＜０．

何利用结核病实验诊断技术早期诊断非分枝杆菌病提诊断依据，特别是抗酸涂片阳性疑似肺结核患者减少误诊率。

１　材料与方法

１．１　研究对象及分组　选择本院２０１３年１１月－２０１６年３月诊治肺结核和非结核分枝杆菌感染患者共５其中确诊为非结核分枝杆菌病（１２例，ＮＴＭ）患者１年龄２平均年龄５男女比８９４例，０７岁，７岁，－例为１．肺结核患者３年龄１８５∶１．０；１８例，４９岁，８－平均年龄４男女比例为３．健康对３．５岁，１２∶１．０；照组２年龄２平均年龄３男女比０例，３５岁，５岁，４－例为１．７５∶１．０。ＮＴＭ与肺结核诊断参考２０１２年非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识及２０１３年中华医学会结核病分会制定《肺结核诊断和治疗指

［４］

，南》且细菌学分枝杆菌培养均为阳性病例。健康

对照组为胸部Ｘ线无感染影像且无肺结核临床表现健康体检者。研究对象分组情况见表１。

表１　研究对象及分组情况

疾病分组

学意义。

２　结果

结核蛋白芯片检测指２．１　痰抗酸涂片、ＴＢＧＲＡ、Ｉ－标在１９４例非结核分枝杆菌病与３１８列肺结核患者阳性率比较结果见表２。其中痰抗酸涂片阳性率分别为５结核蛋白芯片阳性率分别为６．１％、４７．５％，非分枝杆菌病组和肺结核组痰涂片６４．９％、６７．６％，

和结核蛋白芯片检测阳性率分析，两者显示无统计。Ｔ学意义（Ｐ＞０．Ｉ０５）ＢＧＲＡ检测阳性率肺结核－组达８非分枝杆菌病组１经统计学分５．５％，９．６％，。）析有显著性差异（Ｐ＜０．０１

ｎ３１８　０２　

年龄（岁）平均年龄（岁）男女比例

非结核分枝杆菌组１９４　

肺结核组健康对照组

２０７８　－８１４９－　

５７．０　４３．５　２７．８　

１．８５∶１．０３．１２∶１．０１．１∶１．０

２０３４　－２　痰液标本检测方法　研究对象按要求留取清１．

，晨痰液于痰液标本留置器内（含杀菌液）取部分进行萋尔－尼尔逊涂片查抗酸杆菌，痰抗酸涂片按照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》要求操作。取部分痰液利用ＢａｃｔｅｃＭＧＩＴ９６０进行分枝杆　　菌培养，培养阳性样本行改良罗氏药敏及菌型鉴定；

表２　三种检测指标非分枝杆菌和肺结核组阳性率比较

检测指标痰抗酸涂片

）非分枝杆菌病组（９４ｎ＝１阳性数

）肺结核组（１８ｎ＝３阳性数

阳性率％５６．１　６４．９　１９．６　

阳性率％４７．５　６７．６　８０．４　

χ２

Ρ值０．０５６０．５３６００１＜０．

０９１　１２６　３８　

１５１　２１５　２７２　

３．６５　０．３８４　２１９．３６９

结核蛋白芯片ＧＲＡＩＴＢ　－中国实验诊断学　２０１９年６月　第２３卷　第６期

—９３７—

，阴性预测值菌涂阳组敏感度最低（７．４％）１

（；２ＴＩ２．３％）ＢＧＲＡ检测指标在肺结核涂阳组敏感－，。度最高（阴性预测值（８８．１％）５１．３％）

２　ＴＢＧＲＡ检测指标在１９４例ＮＴＭ和３１８例２．Ｉ－特异度、阳性预测值、阴性预测值ＭＴＢ检测灵敏度、比较结果见表３。ＴＩＢＧＲＡ检测指标在非分枝杆－表３　ＴＢＧＲＡ检测指标在ＮＴＭ和ＭＴＢ诊断效能结果Ｉ－疾病分组非分枝杆菌涂阳组

非分枝杆菌涂阴组肺结核涂阳组肺结核涂阴组健康对照组

ｎ１０９　８５　５１１　１６７　０２　

阳性数敏感度（％）１７．４　

２２．３　８８．１　８３．２　

特异度（％）

９５　

９５　９５　９５　

阳性预测值阴性预测值１７．４　

２２．３　５１．３　４０．４　

约登指数０．１２４

０．１７３０．７８１０．７８２

１９　

１９　１３３　１３９　１

９５　９５　９９．３　９９．３　

２．３　选取临床分离培养２３８株分枝杆菌经改良罗

氏培养菌种初步鉴定，其中结核分枝杆菌１牛１０株、结核分枝杆菌８非结核分枝杆菌４３株、５株。经其中结核分枝杆ＤＮＡ微阵列芯片法菌种鉴定结果，菌复合群１９３株，４５株非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌２海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌１株，堪９株，

鸟分枝杆菌１株，偶然分枝杆萨斯分枝杆菌１２株，菌２株。临床分离结核分枝杆菌复合群对常用抗结核耐药情况，链霉素耐药率最高达１异烟肼耐４％、药率９．利福平耐药率６．８％、２％。分离到５种４５株ＮＴＭ主要是胞内和堪萨斯分枝杆菌，其对常用一线抗结核药物均显示高度耐药。见表４。

表４　临床分离培养２３８株分枝杆菌ＤＮＡ微阵列芯片法菌种鉴定结果及抗结核耐药情况

菌株类别

ｎ利福平（ＦＰ）Ｒ例数

异烟肼（ＮＨ）Ｉ例数

链霉素（Ｍ）Ｓ例数

乙胺丁醇（ＥＭＢ）例数

耐药率（％）６．２　

６２．１　１００　５０．０　０　００１　耐药率（％）９．８　

８９．６　１００　７５．０　００１　１００　耐药率（％）１４．０　

６８．９　１００　８３．３　０　１００　耐药率（％）１．０

３１．０１００４１．７０５０．０

结核分枝杆菌复合群１９３　

胞内分枝杆菌２９　

海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌１　

堪萨斯分枝杆菌１２　鸟分枝杆菌１　偶然分枝杆菌２　１２　

１８　１　６　０　２　１９　

２６　１　９　１　２　２７　

２０　１　１０　１　２　２　

９　１　５　０　１　３　讨论

非结核分枝杆菌（是除结核分枝杆菌复ＮＴＭ）和麻风分枝杆菌以外的其它分枝杆合群（Ｂ）ＭＴ

５，６］

。２菌［０１２年中华医学会结核病学分会于非结核

，痰抗酸结核病分会制定《肺结核诊断和治疗指南》涂片只能证明抗酸杆菌存在，并不能区分是ＭＴＢ还

存在敏感性低，但因方法操作简单、是ＮＴＭ感染，

快速，适合基层实验室应用，作为肺结核筛查指

１０，１１］

。从我国历年结核病流行病学调查报告显标［

分枝杆菌病诊断与治疗专家共识指出，ＮＴＭ病感染呈快速增多趋势，成为威胁人类健康的重要公共卫

７］

。利用结核病实验室技术提高对ＮＴＭ病生问题［

示，非分枝杆菌分离率从１９９０年４．９％上升到２０００年１反应ＮＴＭ病呈１．１％，２０１０年则高达２２．２％，

２，１３］１

。本院从２快速上升态势［０１３年１１月－０１６年２阳性率达１３月共分离到３６８例ＮＴＭ株，５．８％，

与文献报道相一致。ＮＴＭ培养阳性率呈上升趋势，

结核蛋白芯片技术作为简便快速诊断结核病方法，、检测人血清中特异性脂阿拉伯甘露糖抗原（ＬＡＭ）

［４］

。从表２可见抗原３８ｋＤ、１６ｋＤ抗体诊断结核病１

的诊断水平，减少ＮＴＭ对健康的威胁。目前针对

胸部影像学发ＮＴＭ病诊断具有呼吸系统临床表现，

现有空洞、多病灶支气扩张及小结节病变等，标本无污染条件下细菌学培养到ＮＴＭ，才能确诊为ＮＴＭ

８，９］

。细菌学培养周期长、病［阳性率不高，免疫学方法存在交叉反应，未筛选到灵敏度和特异度都高的诊断抗原，合理选择联合利用现有结核病实验技术是提高对ＮＴＭ诊断早期诊断有效手段。

本研究从痰抗酸涂片、结核蛋白芯片、ＴＩＢＧＲＡ－检测指标在１与３９４例非结核分枝杆菌病（ＮＴＭ）１８痰抗酸涂片与结核蛋白芯例肺结核病阳性率比较，

片在两组疾病阳性率比较相近，经统计学分析两组。２间均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）０１３年中华医学会

结核蛋白芯片在诊断肺结核有一定临床价值，但其在非结核分枝杆菌感染时同样出现较高阳性反应，ＮＴＭ和ＭＴＢ两组阳性率经卡方检验无显著性差

。分析原因可能所检测三种结核特异）异（Ｐ＞０．０５抗原在非分枝杆菌感染出现交叉免疫，敏感度与特异性欠佳，对于阳性结果临床应综合分析。

ＴＩ６、Ｃ１ＢＧＲＡ检测结核分枝杆菌ＥＳＡＴＦＰ０－－－—９３

８—为抗原剌激机体产生特异性γ－干扰素，在诊断结核病特别是肺外结核有较高灵敏度。从表３可见，ＴＢ－ＩＧＲＡ检测在肺结核涂阳和涂阳组均有较高灵敏度

（８８．１％、８３．２％）

可作为肺结核病早期筛查重要指标，与王宗义等报道一致［１５］

。而ＴＢ－ＩＧＲＡ检测指标在ＮＴＭ组灵敏度不到２０％，

且有较好的阴性预测值，提示ＴＢ－ＩＧＲＡ指标在鉴别诊断ＮＴＭ和ＭＴＢ有良好应用价值。回顾分析１９４例ＮＴＭ病患者发现，由于ＮＴＭ和ＭＴＢ在临床表现、实验室诊断技术、影像学表现、组织病理等表现极为相似，若无菌型鉴定结果易误诊为肺结核。本文病例高达８０％ＮＴＭ病例初诊为肺结核入院，并予以抗结核治疗，造成治疗效果差、周期长，并出现药物性肝肾功能损害、白细胞数量下降等不良反应。本文实验对疑似患者痰液样本利用Ｂａｃｔｅｃ　ＭＧＩＴ　９６０进行分枝杆菌培养，培养阳性液体样本均经抗酸染色证实，随后进行改良罗氏药敏及菌型初步鉴定。根据鉴别培养管上分枝杆菌生长情况，如两种鉴别培养管中培养基上无分枝杆菌生长，则为牛结核分枝杆菌；如两种鉴别培养管中培养基上生长，则为非结核分枝杆菌菌群；如对硝基苯甲酸（ＰＮＢ）培养基上分枝杆菌不生长而噻吩２－羧酸肼（ＴＣＨ）培养基上有分枝杆菌生长，则报告为结核分枝杆菌。临床疑似患者利用Ｂａｃｔｅｃ　ＭＧＩＴ　９６０结核分枝杆菌培养阳性液体分离株进行分枝杆菌菌种鉴定（ＤＮＡ微阵列芯片法）。结核分枝杆菌ＤＮＡ微阵列芯片法针对临床常见分枝杆菌设计特异性ＰＣＲ扩增引物以及种属特异性寡核苷酸片段探针。以临床分离的致病菌株ＤＮＡ为模板，运用独特不对称ＰＣＲ技术扩增，引物末端标记荧光分子，扩增过程中待检ＤＮＡ分子被扩增并带有荧光标记ＤＮＡ片段。将带有荧光标记ＰＣＲ扩增产物与微阵列芯片探针进行杂交反应，分枝杆菌种属特异性寡核苷酸探针与序列匹配的ＰＣＲ扩增产物形成稳定二级结构。采用基因芯片微量点样技术，探针在芯片特定位置排列，推断出相应被测细菌

ＤＮＡ相关信息，

鉴定出细菌的种类［１

６］。本文实验使用博奥生物晶芯分枝杆菌菌种鉴定试剂，可检测包

括临床常见分枝杆菌的１７个种或群。从表４中可见，临床分离培养２３８例分枝杆菌利用微阵列芯片技术进行菌种鉴定，其中１９３株为结核分枝杆菌复合群，其中３种一线抗结核药耐药率大于５％。４５株ＮＴＭ菌种鉴定包括５种ＮＴＭ，其中胞内分枝杆

菌２９株（６４．４％）、堪萨斯分枝杆菌１２株（２６．７％）、偶然分枝杆菌２株、海分枝杆菌－溃疡分枝杆菌和鸟

Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，Ｊｕｎｅ，２０１９，Ｖｏｌ　２３，Ｎｏ．６分枝杆菌各１株，５种ＮＴＭ对临床常用一线抗结核

药物均显示高度耐药，与盛青等报道相一致［

１７］

。临床病例误诊误治极易造成患者病程迁延，

肺内病灶纤维增殖，使得ＮＴＭ治疗周期更久。而ＴＢ－ＩＧＲＡ检测指标在ＮＴＭ组有较好阴性预测值，在临床诊疗中对于ＴＢ－ＩＧＲＡ检测阴性疑似肺结核患者，应尽早多次进行分枝杆菌培养或有条件进行支气管活检组织和灌洗液培养，以提供细菌学确诊依据。在细菌学分枝杆菌培养结果未报告前，考虑到临床疗效不确切，治疗费用和抗结核药物不良反应，临床医生可对于症状轻微患者，不进行早期抗结核治疗。

本研究发现痰抗酸涂片、结核蛋白芯片在早期筛查肺结核病时有一定临床应用价值，但其在ＮＴＭ和ＭＴＢ感染均可显示阳性反应，对疑似ＮＴＭ感染患者无法鉴别诊断。ＴＢ－ＩＧＲＡ检测在ＮＴＭ组有较好的阴性预测值，可作为ＮＴＭ和ＭＴＢ鉴别诊断指标，尤其是痰抗酸涂片阳性而ＴＢ－ＩＧＲＡ检测阴性疑似肺结核患者，应充分考虑ＮＴＭ感染，给临床提供早期诊断依据。

作者简介：陈　蕾（１９７６－），副主任技师，主要从事临床医学感染免疫检验。参考文献：

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（）收稿日期：０１８－１１－１３２

（）文章编号：１００７－４２８７２０１９０６－０９３９－０５

单核细胞对鉴诊急性胰腺炎的价值分析

陈莎燕１，陈明慧１，赵　琳１，曾昭伟１，房　杰１，孙兰菊１，高　雪２＊

）（天津市南开医院检验学部，滨州医学院，天津３山东烟台２００１００；２．６４００３１．

目的　探讨单核细胞对急性胰腺炎（诊断和分型鉴别价值。方法　收集２摘要：Ａ２Ｐ）０１４年５月－０１７年５月天津市南开医院住院的急性胰腺炎患者５按疾病严重程度分为轻型（组、中重型（组和重型（组，ＭＡＭＳ２１例，Ｐ）ＳＡＰ）ＡＰ）收集患者的一般资料和Ｍ血糖”和“血钙”以经典指标“纳入同期非急性胰腺炎患者３０例作为对照组，ｏｎ％及Ｍｏｎ＃，，）但Ｍ为对比进行统计与分析。结果　①急性胰腺炎组与对照组之间Ｍ血钙ｏｎ％差异无统计学差异（０５ｏｎＰ＞０．＃、（；）））和血糖（差异有统计学意义（ＣＧＣＰ＜０．ａｌｕ０５ＡＰ患者的Ｍｏｎ＃低于ＭＡＰ患者，ａ明显低于ＭＡＰ及ＭＳＡＰ②Ｓ、、；）（）（患者，ＧＭＣＧＭｌｕ明显高于ＭＡＰ及ＭＳＡＰ患者，ｏｎ０５ａ０１ｌｕ０１）ＳＡＰｏｎ＃Ｐ＜０．Ｐ＜０．Ｐ＜０．１组患者的Ｍ＃（－；（／／和Ｇ２患者（Ｐ＜０．ｌｕ低于ＭＳＡＰ０５）ＯＣ曲线预测ＳＡＰ曲线下面积为Ｃａ０．６６０．６９）ｏｎ＃（０．６００．５５）－③Ｒ＞Ｍ＞；。结论　Ｍ）（（（／）ＲＯＣ曲线预测ＭＳＡＰ亚类曲线下面积为Ｍｏｎ０．６６ｌｕ０．６２）ａ０．５５）ｏｎ＃可Ｇｌｕ０．５９０．６６＃（＞Ｇ＞Ｃ能是可以辅助鉴别急性胰腺炎严重程度和亚类的有效指标。

单核细胞；急性胰腺炎；重症急性胰腺炎；胆道疾病；腹腔感染关键词：

中图分类号：Ｒ９１５

文献标识码：Ａ

ＴａＳＣＨＥＮ　ＭｈＺＨＡＬｅａｈｅＶａｌｕｅＡｎａｌｓｉｓｏｆＭｏｎｏｃｔｅｉｎＡｓｓｅｓｓｉｎＡｃｕｔｅＰａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓｈａ－ｎ，ｉｎｕｉ，Ｏ　ｉｎ，ｔｌ．　　　　　　　　　ＣＨＥＮ　ｙｇ－ｙｙｇ　（ＤｏＬＳＴＮＨＴＣｅａｒｔｍｅｎｔａｂｏｒａｔｏｒｃｉｅｎｃｅ，ｉａｎｉｎ　ａｎｋａｉ　ｏｓｉｔａｌ，ｉａｎｉｎ３００１００，ｈｉｎａ）　ｆ　ｐｙ　ｊｐｊ：）ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｏｓｔｕｄｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｍｏｎｏｃｔｅ（Ｍｏｎｉｎａｓｓｅｓｓｉｎａｃｕｔｅａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ（ＡＰ）．Ｍｅｔｈｏｄｓｈｅａ－　Ｔ　　　　　　　Ｔ　ｙｙｇｐｊ　　，，ｎａｌｓｉｓｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｍｏｎ５２１ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡＰｉｎＴｉａｎｉｎＮａｎｋａｉＨｏｓｉｔａｌｆｒｏｍ　Ｍａ２０１４ｔｏＭａ２０１７．Ａｃｃｏｒｄｉｎ　　　　　　　　　　　ｙｇｊｐｙｙｇ　，，ｍｏｄｅｒａｔｅｄｌｓｅｖｅｒｅａｃｕｔｅｔｏｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｏｆｄｉｓｅａｓｅｔｈｅｃａｓｅｓｗｅｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏｍｉｌｄａｃｕｔｅａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓｒｏｕＭＡＰ）　　　　　　　　　　　　ｙｙｐｇｐ（　　，ａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ（ＭＳＡＰ）ａｎｄｓｅｖｅｒｅａｃｕｔｅａｎｒｅａｔｉｔｉｓ（ＳＡＰ）ｒｏｕｓｉｎｃｌｕｄｉｎ３０ｃａｓｅｓｗｉｔｈｏｕｔＡＰａｓｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕｉｎｔｈｅ　　　　　　　　　ｐｐｇｐｇｇｐ　　ｓａｍｅｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅｄｅｍｏｒａｈｉｃｄａｔｕｍａｎｄｄａｔｕｍｏｆｍｏｎｏｃｔｅｅｒｃｅｎｔａｅ（Ｍｏｎ％）ａｎｄｍｏｎｏｃｔｅａｂｓｏｌｕｔｅｎｕｍｂｅｒ　　　　　　　　　　　ｐｇｐｙｐｇｙ（ＭｏｎｏｆａｌｌｃａｓｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆＭｏｎｏｃｔｅｗｉｔｈｔｈｅａｎａｌｓｉｓａｎｄｃｏｍａｒｉｓｏｎｏｆｂｌｏｏｄｃａｌｃｉ＃）　　　　　　　　　　　　　　　　　　－ｙｙｐｕＰ＞ｍａｎｄｌｕｃｏｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｎ％，ＣａａｎｄＧｌｕｗｅｒｅｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎＡＰａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ　　　Ｍ　　　　　　　　　　　ｇｙｇｐ（　

，，）ｗＭ０．０５ｈｉｌｅＭｏｎＣａａｎｄＧｌｕｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎＡＰａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ０５）ｏｎ＃ｉｎＰ＜０．　＃，　　　　　　　　　　ｙｇｐ（　，，ＳＡＰｒｏｕｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎＭＡＰｒｏｕＣａｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗｅｒｔｈａｎＭＡＰａｎｄＭＳＡＰｒｏｕｓｈｏｗｅｖｅｒＧｌｕｗａｓｓｉ　　　　　　　　　　　　　　　－ｇｐｇｐｇｙｇｐｇ　　（，，，ＭｉｆｉｃａｎｔｌｈｉｈｅｒｔｈａｎＭＡＰａｎｄＭＳＡＰｒｏｕｓｏｎ＃，０５．Ｃａ０１．Ｇｌｕ０１）．Ｍｏｎ＃ａｎｄＧｌｕｉｎｎＰ＜０．Ｐ＜０．Ｐ＜０．　　　　　　　ｙｇｇｐ　

ＭＳＡＰ１ｗ２ｇｒＰ＜０．ｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗｅｒｔｈａｎＭＳＡＰｏｕ０５）．ＴｈｅａｒｅａｓｕｎｄｅｒＲＯＣｃｕｒｖｅｆｏｒｒｅｄｉｃｔｉｎＳＡＰｏｆ－－　　　　　　　　　　ｇｙｐ（ｐｇ　　／）ｗｅｓｗｅｒｅＭｏｎｔＣａ（０．６６０．６９ｅｒｅｈｉｈｅｓｔａｍｏｎｔｈｅｔｈｒｅｅ．ＴｈｅａｒｅａｓｕｎｄｅｒＲＯＣｃｕｒｖｅｆｏｒｒｅｄｉｃｔｉｎＭＳＡＰｓｕｂ　　－　　　　　　　　　　ｐｙｇｇｐｇ　　））（）０．６６ｌｕ（０．６２ａ０．５５．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｏｎａｂｅａｕｓｅｆｕｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｔｏｈｅｌｆｕｌｌｉｄｅｎｔｉｆｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔａｎｄ＃（＞Ｇ＞Ｃ　Ｍ＃ｍ　　　　　　ｙｐｙｙｙ　　　ｔｈｅｓｕｂｅｓｏｆＡＰ．ｔ　　　－ｐｙ

：；；；；ＫｅｗｏｒｄｓＭｏｎｏｃｔｅＡｃｕｔｅａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓＳｅｖｅｒｅａｃｕｔｅａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓＢｉｌｉａｒｄｉｓｅａｓｅＡｂｄｏｍｉｎａｌｃａｖｉｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　　　　ｙｐｐｙｙｙ　　　

（）ＣＪ　ＬＤ２ｈｉｎａｂ　ｉａｎ，０１９，２３：０９３９　ｇ）；国家自然科学基金项目（批准号为：基金项目：天津市卫生计生行业高层次人才选拔培养工程（青年医学新锐）８１７０３８４６＊通讯作者