常用pH缓冲液

常用pH缓冲溶液的配制和pH值

常用pH缓冲溶液的配制和pH值

http://www.biodrug.cn 序号 溶液名称 配制方法 pH值 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与25.0 ml 0.2 1 氯化钾-盐酸 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至100 ml 2 氨基乙酸-盐在500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g，加酸 一氯乙酸-氢氧化钠 480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L 在200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至1 L 把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢3.6 2.8 2.3 1.7 3 4 邻苯二甲酸钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L HCl混合均氢钾-盐酸 匀，加水稀释至100 ml 

邻苯二甲酸把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢5 氢钾-氢氧化钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH混合钠 6 均匀，加水稀释至100 ml 5.4 4.8 六亚甲基四在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，胺-盐酸 加浓HCl 10 ml，再加水稀释至1 L 磷酸二氢钾-把25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 7 氢氧化钠 6.8 8 硼酸-氯化钾把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 9.1 8.0 -氢氧化钠 把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水9 氯化铵-氨水 以2：1比例混合均匀 硼酸-氯化钾把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾10 与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，-氢氧化钠 加水稀释至100 ml 10.0 11 11.6 化钠-氢氧化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀 氨基乙酸-氯把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠 磷酸氢二钠-把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 12.0 12 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀氢氧化钠 释至100 ml 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl与66.0 ml 氯化钾-氢氧13 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至化钠 100 ml 13.0 一、常用溶液的配制 （一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。 2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升） pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 8.0 9.9 12.2 15.3 18.6 22.4 26.7 92.0 90.1 87.8 84.7 81.4 77.6 73.3 7.1 7.2 7.3 7.3 7.5 7.6 7.7 66.6 72.0 76.8 80.8 84.1 87.0 89.4 23.4 28.0 23.2 19.2 15.9 13.0 10.6 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 31.8 37.5 43.5 49.6 55.4 61.1 68.2 62.5 56.5 50.4 44.6 38.9 7.8 7.9 8.8 8.1 8.2 8.4 91.5 93.2 94.7 95.8 97.0 98.0 8.5 6.8 5.3 4.2 3.0 2.0

（三）0.15Mol/L PB液 附表2 0.15Mol/LPB液配制法 pH 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 81.0 87.0 0.15Mol/L NaH2PO4（ml） 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 19.0 13.0 Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。



Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。 NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。

（四）0.2Mol/L PB缓冲液 附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 8.0 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 0.2Mol/L NaH2PO4（ml） 92.0 87.7 81.5 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 7.4 7.6 7.8 8.0 81.0 87.0 91.5 94.7 19.0 13.0 8.5 5.3 0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L

欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/L PH 7.2）

NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4 1.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

KH2PO4 0.2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗

涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）

1．硼酸（Ｈ3BO3）

0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）

0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。

附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法 pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 7.4 7.6 7.8 8.0 1.0 1.5 2.0 3.0 0.2Mol/L硼酸（ml） 9.0 8.5 8.0 7.0 8.2 8.4 8.7 9.0 pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 3.5 4.5 6.0 8.0 0.2Mol/L硼酸（ml） 6.5 5.5 4.0 2.0 （七）巴比妥缓冲液

1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥钠 47.6g 蒸馏水 3 000ml 1.17N HCl 55.0ml

（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水） ⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1.17 N HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。

2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml 3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml

（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5 附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法 pH 0.2Mol/L 0.1Mol/L pH 0.2Mol/L 0.1Mol/L 23℃ 37℃ Tris（ml） HCl（ml） 23℃ 37℃ Tris（ml） HCl（ml） 9.10 8.95 8.92 8.76 8.75 8.60 8.62 8.48 8.50 8.37 8.40 8.27 8.32 8.18 25 25 25 25 25 25 25 5 7.5 10.5 12.5 15.5 17.5 20.0 8.06 7.90 7.96 7.82 7.87 7.73 7.77 7.63 7.66 7.52 7.54 7.40 7.36 7.22 25 25 25 25 25 25 25 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 （九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH，0.05Mol/L

25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）

附表6 Tris—HCl缓冲液配制法 pH 23℃ 9.10 37℃ 8.96 0.2Mol/L 0.1NHCl Tris(ml) 25 (ml) 5 23℃ 8.05 pH 37℃ 7.90 0.2Mol/L 0.1NHCl Tris(ml) 25 (ml) 27.5 8.92 8.74 8.62 8.50 8.40 8.32 8.23 8.14 8.78 8.60 8.48 8.37 8.27 8.18 8.10 8.00 25 25 25 25 25 25 25 25 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 7.96 7.87 7.77 7.66 7.54 7.36 7.20 7.82 7.73 7.63 7.52 7.40 7.22 7.05 25 25 25 25 25 25 25 25 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 45.0 三羟甲基氨基甲烷（Tris）

分子量=121.14

0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。

0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。

（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液

NaHCO3 3.70g Na2CO3 0.60g

溶于600.00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液 1．配制pH8.0磷酸缓冲液 0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml 0.1N NaH2PO4 5.50ml



混合即可

2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液

1．贮存液 NaCl 80.00g KCl 4.00g Na2HPO4·12 H2O 1.52g

KH2PO4 0.60g 葡萄糖 4.00g 0.4％酚红液 50.00ml 双馏水加至 100.00ml

115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液 贮存液 1份 双馏水 9份

115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶

液呈橙红色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）

配方1：氯化汞 6.0g

碘化钾 12.4g 20％NaOH 30ml 加蒸馏水至 100ml 配方2：碘化汞 11.5g

碘化钾 8g 蒸馏水 50ml

（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子。 （十四）阿氏（Alsever’s）液

葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.80g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml

溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）

青霉素（40万U） 5支 链霉素（200万μg） 1支

分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装

小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉

素100ug/ml。 （十六）洗液（清洁液） 配方1：重铬酸钾 150g

蒸馏水 300ml 浓硫酸 3 000ml

将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为

强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上

眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液

加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：浓硫酸 50%

蒸馏水 50% 重铬酸钾 5% 此为中等强度洗液。 配方3：重铬酸钾 100g

蒸馏水 1 000ml 加热溶解，冷却后缓慢加入

工业硫酸 100ml

此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，

经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。