不同抗凝剂及标本放置时间对T淋巴细胞亚群检测结果的影响

不同抗凝剂及标本放置时间对T淋巴细胞亚群检测结果的影响

作者：汪鎏漪 宋建新

来源：《医学信息》2014年第03期

摘要：目的 探讨不同抗凝剂及标本放置对流式细胞术检测T淋巴细胞亚群检测结果的影响。方法 采集健康体检者血液，分别用肝素钠、EDTA-K2抗凝，室温保存，在不同时间进行T淋巴细胞亚群检测。结果 EDTA-K2抗凝血与0h相比，CD3+、CD8+细胞百分率在24h开增高，CD3+到48h明显增高（P0.05）；肝素钠抗凝血CD3+、CD4+、CD8+细胞到72h与0h相比无统计学意义（P>0.05）。结论 不同抗凝剂在室温下不同保存时间对T淋巴细胞检测有影响，EDTA-K2抗凝的标本在室温下应在24h内完成检测；肝素钠抗凝的标本可在72h内测定。

关键词：流式细胞术；标本放置时间；T淋巴细胞亚群

T淋巴细胞亚群是目前临床用于评估患者细胞免疫功能常用的检测指标之一，其准确性直接影响临床诊断。因此标本采集真空采血管所用抗凝剂及标本送检及保存时间等因素都会影响测定结果。针对这一问题，本研究对静脉血采集后不同抗凝剂、标本放置时间对T淋巴细胞亚群的影响进行实验分析和评估，报道如下。 1资料与方法

1.1标本来源 2013 年9月本院健康体检者10例，其中男6例，女4例，平均年龄37岁。 1.2主要仪器和试剂 Beckman Coulter公司FC500型流式细胞仪，荧光标准微球Flow-Check、CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD及同型对照均购自Immunotech公司。 1.3方法 空腹采集健康体检者静脉血于EDTA-K2及肝素钠抗凝管各2.0mL，充分混匀，室温（20℃）保存。分别于采血后0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h及72h按常规方法用CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD标记并设同型对照；用荧光标准微球Flow-Check校准流式细胞仪的光路和流路，用同型对照设定阳性域值后检测，每份样本均检测并分析10000个细胞，记录各抗原表达的百分率。

1.4统计学处理 使用SPSS12.0统计软件包进行统计学分析，各抗原表达的百分率以x±s表示，组间比较常用t检验。 2结果

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2.1 EDTA-K2抗凝不同时间CD3+、CD4+、CD8+表达见表1。CD3+、CD8+细胞抗原表达随着标本放置时间的延长而逐渐增高，CD8+细胞到36h、CD3+细胞到48h与0h相比明显增高，差异有统计学意义（P0.05）。

2.2 肝素钠抗凝不同时间CD3+、CD4+、CD8+表达见表2。CD3+、CD4+、CD8+细胞抗原表达在标本放置到72h与0h相比无统计学意义（P>0.05）。 3讨论

通过流式细胞术检测T淋巴细胞亚群评估机体细胞免疫功能是目前普遍采用的方法。但由于受医院设备条件和地理等因素的限制，采样送检与上机检测间往往不能紧密衔接，样品保存时间过长会影响结果。而细胞不同抗原的表达对不同抗凝剂抗凝全血及抗凝血放置时间的要求各不相同[1，2]。

本组测定结果显示，EDTA-K2抗凝的血液标本，CD3+，CD8+细胞抗原表达分别从24h和16h逐渐增高，CD3+在样品保存至48h与0h相比明显增高（P0.05）。这是否与随着标本放置时间过长使细胞膜通透性增加，胞浆内抗原的暴露，还是其它原因引起有待于进一步研究。肝素钠抗凝的血液标本CD3+、CD4+、CD8+细胞抗原表达在标本放置到72h与0h相比无统计学意义。

综上所述，不同抗凝剂的抗凝血及在室温下不同保存时间对T淋巴细胞检测有影响。在用流式细胞仪检测T淋巴细胞时，建议最好用肝素钠作抗凝剂，而用EDTA-K2抗凝时，标本应该在24h内完成检测。 参考文献：

[1]曹鲁宁，张玲珍，仲人前，等.流式细胞仪检测人白细胞抗原-B27的影响因素[J].检验医学，2007，22（3）：233-234.

[2]张爱梅，翟志敏，徐修才，等.标本放置时间及年龄对CD4+CD25+调节性T细胞的影响[J].免疫学杂志，2007，22（1）：62-65. 编辑/孙杰