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电针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织自由基的干预作用

来源：帮我找美食网

第7卷　第3期

2005年5月

辽宁中医学院学报

JOURNALOFLIAONINGCOLLEGEOFTCM

Vol.7　No.3

May,2005

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织自由基的干预作用

林庶茹,田国伟,曲　怡

(辽宁中医学院,辽宁沈阳110032)

　　摘　要:目的:比较电针对实验性脑缺血再灌注大鼠,不同的再灌注时间脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。方法:采用可逆性脑缺血再灌注大鼠模型,通过电针人中穴、中冲穴(双侧)及“风府”穴,以羟胺法和硫巴比妥酸盐反应(TBAR)法进行SOD和MDA的检测。结果:缺血再灌注组与模拟对照组相比,

SOD的活性明显下降,MDA的含量大量增加,都有显著性的意义(P<0105,P<0101)。针刺组与缺血再灌注组

比较,SOD的活性有明显上升,MDA的含量也有明显下降,有显著性的意义(P<0105,P<0101)。结论:电针对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的治疗作用和保护作用。

关键词:脑缺血再灌注;电针;SOD;MDA

中图分类号:R245197　　文献标识码:B　　文章编号:1008-4231(2005)03-0274-02

　　缺血再灌注损伤是指机体器官缺血一定时间后再恢复血流灌注,组织损伤反而进行性加重[1]。其发病机理复杂,其治疗更是人们积极探索研究,迫切解决的问题。多年来的研究已经证实,在缺血性脑血管病的栓塞期给予及时的针刺治疗,能够很好的对脑血管再通(即再灌注)造成的损伤起到保护作用,降低本病的致死率和致残率。

本实验模拟脑缺血再灌注大鼠模型,在缺血后期给予电针刺激,并通过检测不同灌注时间脑组织中的SOD活性和MDA含量,来进一步揭示电针对本病的干预作用。现报道如下。1　材料与方法111　实验动物及分组　辽宁中医实验动物中心提供Wistar大鼠42只,雌雄不拘,体重240～300g。随机分为7组,每组6只。即模拟对照组;局灶性脑缺血2h/再灌注lh组(Ⅰ2h/R1h);局灶性脑缺血2h/再灌注3h组(Ⅰ2h/R3h);局灶性脑缺血2h/再灌注6h组(Ⅰ2h/R6h);局灶性脑缺血2h/再灌

[9]　ShankarR,ZhuJS,LaddB,etal.Centralnervoussystemnitric

oxidesynthaseactivityregulatesinsulinsecretionandinsulinac2tion[J].JClinInvest,1998,102(7):1403

注1h组+电针组(Ⅰ2h/R1h+EA);局灶性脑缺血2h/再灌注3h+电针组(Ⅰ2h/R3h+EA);局灶性脑缺血2h/再灌注6h+电针组(Ⅰ2h/R6h+EA)。112　大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备　模型制备采用Zealonga大鼠大脑中动脉阻断(middlecerebralarteryocclusion,MCAo)法[2]并加以改进。大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0135ml/100g),颈部正中切口,分离出颈总动脉(commoncarotidartery,CCA)、颈外动脉(externalcarotidartery,ECA)及颈内动脉(internalcarotidartery,ICA),并分别穿线备用。然后结扎CCA的近心端,在ECA与ICA的分叉处结扎颈外动脉。然后在距ECA与ICA分叉处3mm的颈总动脉上,用眼科剪剪开一个约013mm小口,再将直径约为0125mm的钩丝前端加热成光滑的小圆球并从剪口处插入,经CCA分叉处进入ICA,向上深入至分叉以上19～20mm,结扎ICA近心端,让钩丝阻塞大脑中动脉

[10]　马向红,黄体钢.X综合征的研究现状及进展[J].实用心脑肺

血管病杂志,2002,10(5):296

InfluencesofteapolyphenolsonthelevelofNOandactivityofNOSinmodelratsininsulinresistancesyndrome

WANGDan1,2,LVJun2hua1,ZHANGShi2ping1,GAIXiao2dong2

(11PharmacyCollegeofJinanUniversity,Guangzhou510632,Guangdong,China;

21MedicalCollegeofBeihuaUniversity,Jilin132013,Jilin,China)

　　Abstract:Objective:TostudytheeffectsofteapolyphenolsonthelevelofNOandactivityofNOSinmodelratsofinsulinresis2tancesyndrome(IRS).Methods:Themodelratsofinsulinresistancesyndromewereproducedin6weeksbyfeedingfoodwithrich2fat,rich2glucoseandhigh2salt.AndthentheratswereadministeredbyTPonceadayforsixweeks,bloodwassampledtomeasurethelevelsoffastingbloodglucose,bloodlipid,insulin,NOandtheactivityofNOS.Results:TheTPdecreasesthelevelsofNOandbloodlipid,andinhibitstheactivityofNOSsignificantly,andalsoISIisincreasedsignificantly.Conclusion:TPcanimprovetheconditionsofIRS,anditseffectsmaybeconcernedwithdecreasingthelevelofserumNOandactivityofNOSintheratsofIRS.

Keywords:teapolyphenols;insulinresistancesyndrome;insulinresistance;NO;NOS

收稿日期:2004-12-10

作者简介:林庶茹(1951-),女,辽宁抚顺人,高级实验师,主要从事分子生物、教学与研究。

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2期林庶如等:电针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织自由基的干预作用　　　

(middlecerebralartery,MCA)2h。然后将钩丝轻缓外抽,使其头端回到ICA的结扎处,实现再灌注,分别灌注1h、3h、6h。模拟对照组只分离出CCA、ECA及ICA,不插入钩丝。113　模型成功的标准　参照Zea-Longa[2]建立的评定神经功能缺损程度的五级4分法标准,待动物清醒后(约术后40min)进行神经功能评分,方法如下:0分,无神经功能缺损症状;1分,轻微神经功能缺损,不能完全伸展左侧前爪;2分,中度局灶性神经功能缺损,向左侧转圈;3分,重度局灶性神经功能缺损,向左侧倾倒;4分,不能自发行走,意识水平下降。造模大鼠符合1～3分中任一项或几项的,视为造模成功,纳入到实验中,不符合的弃之不用。114　电针刺激的干预方法　电针组动物在MCAo后1h给予电针刺激,选取人中穴、中冲穴(双侧)及风府穴进针。人中穴在唇裂鼻尖下1mm正中处。向上斜刺1mm;中冲穴在中指末节尖端中央,直刺1mm;风府穴在枕骨顶嵴后枕寰关节背凹陷处,向后下方斜刺1mm(选穴依据参照1999年9月《实验针灸学》附常用实验动物的针灸穴位)。电针仪选用广东省汕头市医用设备厂生产的6805—A型,疏密波,频率2Hz,强度2mA左右,以大鼠肢体或针柄微微颤动为度,刺激15min。115　脑组织SOD及MDA含量的测定　在各时间点断头取脑,冰浴环境下将缺血侧大脑取出,-20℃冻存,集齐标本。取脑称重,放入10mm×150mm的玻璃试管中,按重量/体积1∶10的比例加入生理盐水,然后用匀桨器将其制成10%的脑组织匀桨液。再立即以3000r/min,离心15min,取上清液,-20℃冻存,以备指标的检测。笔者以羟胺法和硫巴比妥酸盐反应(TBAR)法进行SOD活性和MDA含量的检测,试剂盒购自南京建成生物工程研究所,测试步骤严格按照说明进行操作。组织蛋白定量用考马斯(Coomassie)亮蓝法,比色用DU640型的核酸蛋白分析仪。116　统计分析　采用SPSS1010统计软件,对实验数据进行微机处理。结果以均数±标准差(X󰁫±s)表示,行组间t检验。2　结　果

见表1、表2。各缺血再灌组与模拟对照组相比,SOD活性非常显著的降低(P<0.01),MDA含量非常显著的升高(P<0101)。并且随着再灌注时间的延长,各组之间SOD活性没有显著差异。而I2h/R1h组与I2h/R6h组相比,MDA含量却有显著性差异(P表1　脑组织中SOD活性的变化(Nu/mg,X󰁫±s)

　　各电针组与相对应的缺血再灌组相比,SOD活

性显著上升(P<0105),MDA含量显著下降(P<0105)。其中,I2h/R3h组与I2h/R3h+EA组的SOD含量有极显著差异(P<0101)。I2h/R3h组与I2h/R3h+EA组,I2h/R6h组与I2h/R6h+EA组的MDA含量有极显著差异(P<0101)。

表2　脑组织中MDA含量的变化(nmol/g,X󰁫±s)

模拟对照组I2h/R1h组

I2h/R1h+EA组I2h/R3h组I2h/R3h+EA组I2h/R6h组I2h/R6h+EA组6666666

结　果44117±4144

69167±5167#53133±5176377100±5117#52183±2141387167±4170#47167±31733

　　注:各缺血再灌组与模拟对照组比较,#P<0101;各电针组与

对应的缺血再灌组比较,3P<0105,33P<0101。

3　讨　论

近年来,国内外的研究已经证明,自由基是脑缺

血再灌流损伤的最重要原因。MDA作为氧自由基生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的代谢产物,其含量的变化可间接反映组织中氧自由基含量的变化。SOD是一种带阴电荷的蛋白质,它通过歧化的方式清除超氧阴离子自由基。在脑缺血再灌注期间,氧自由基大量生成,MDA含量升高,SOD活性会明显下降。　　针刺对于缺血性脑血管病的治疗,越来越得到大多数医务工作者的肯定。傅立断等[3]发现,针刺对脑缺血再灌注所致的自由基水平有明显的改善作用,尤以再灌注组最为显著,提示针刺可以抑制自由基产生及连锁反应的发生,对神经元的损伤具有明显的保护作用。中医学认为本病属于中风的范畴,其病因病机是气血逆乱,产生风、火、痰、瘀,导致脑脉痹阻所致。本实验选用的人中、风府二穴,可奏醒脑开窍、健脑补髓、疏风通络的功效[4]。中冲穴为手厥阴心包经的并穴“,并主心下满”,井穴为古代常用的急救穴。《针灸易学》:“中风不省人事,水沟,中冲,合谷……”。三穴合用,可大大加强对本病的治疗作用。

实验结果显示,缺血再灌注损伤可造成SOD活性明显下降,MDA含量明显的升高,并且有极显著的统计学意义。而针刺可以使下降的SOD活性明显升高,升高的MDA含量明显下降,也具有明显的统计学意义。进一步证实了针刺可以明显的降低脑缺血再灌注时自由基造成的损伤。◆

参考文献:[1]　赵明.脑缺血再灌注损伤机理及药物保护的研究进展[J].锦州

医学院学报,2002,23(5):72

[2]　ZealongaEL,WeinsteinPR,CarsonS,etal.Reversiblemiddle

cerebralarteryocclusionwithoutcrainietomyinrats[J].Stroke,1989,20(1):84

模拟对照组I2h/R1h组

I2h/R1h+EA组I2h/R3h组I2h/R3h+EA组I2h/R6h组

I2h/R6h+EA组

6666666

结　果349133±2117998183±11111#391150±391253152183±16157#465133±351313138133±17125#611150±561043

[3]　傅立新,石学敏,李平,等.针刺对脑缺血及再灌注家兔脑水肿、

　　注:各缺血再灌组与模拟对照组比较,#P<0101;各电针组与

对应的缺血再灌组比较,3P<0105,33P<0101。

自由基病理学损伤的保护作用及相关性分析[J].中国中医基础医学杂志,2000,6(2):52[4]　王利,张学勤,张勇,等.电针对大鼠脑局部缺血再灌流后c2

fos、mRNA表达的影响[J].中国针灸,2000,(4):241

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