食品中还原型Vc的测定(分光光度法)

Determination of reductive form ascorbic acid in foods 氢型抗坏血酸、二酮古乐糖酸三种形式存在于食品中。 测食品中总Vc含量的方法：荧光法和2，4二硝基苯肼法。 测食品中还原型Vc的方法：分光光度法。 新鲜食品中Vc主要以还原型的形式存在，因此，本实验学习食品中 还原型Vc的测定。 一、实验目的 1.理解食物中维生素C的分布规律以及维生素C的理化特性。 2.掌握分光光度法测定食品中还原型Vc的原理、操作步骤、注意事项 二、实验原理 在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁 酰内酯衍生物。在最大吸收波长420 urn处测定吸光度，与标准系列比较 定量。 三、仪器 1.722分光光度计 若干，提前20min打开预热 2.10ml具塞玻璃比色管 10个/组 在蔬菜水果中含量丰富，易溶于水，酸性，以还原型抗坏血酸、脱3.标签纸，记号笔 4.组织捣碎机 5.菜刀、菜板、一次性手套 6.棕色容量瓶100ml，胶头滴管 7.移液管0.5ml，2ml 移液管1 ml，5 ml，吸小球 8.漏斗、滤纸 9.托盘天平， 10.烧杯100ml 若干 2个 1个/组 2个/组 1个/组 1个/组 1个/组 2个/组 四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。） 1.乙酸溶液(2mol/L) ：吸取11.6mL冰乙酸，分装，1瓶/组 加蒸馏水定容至100mL 2.乙酸溶液(0.5mol/L): 吸取2.9mL冰乙酸，分装，1瓶/组 加蒸馏水定容至100mL 3. EDTA二钠盐溶液（0.25mol/L）： 称取9.3g 分装，1瓶/组 二钠水合EDTA二钠盐于蒸馏水中，加热 溶液，放冷后定容至100mL。作用：是螯合剂，与金属离子螯合，避免有色的金属离子对实验的显色产生干扰。 4. 2 g/L固蓝盐B溶液（显色剂）：准确称取分装，1瓶/组 0.2g固蓝盐B，加蒸馏水溶液于100 ml棕色容量瓶中，稀释至刻度（室温下贮存可稳定3d以上）。 5. 抗坏血酸标准储备液（0.1 g/L）：精密称取分装，1瓶/组 纯Vc粉末0.2000g，加20 mL2mol/L乙酸溶液溶解后移入100 mL棕色容量瓶中并定容， 摇匀。冷藏保存（＜10℃下冷藏保存稳定2d）。 6. 抗坏血酸标准使用溶液(0.1 g/L):精密吸取分装，1瓶/组 5. 0 mL抗坏血酸标准储备溶液(2..0g/L)于1 00 mL棕色容量瓶中，加5 mL乙酸溶液(2 mol/L)， 用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当 于100μg抗坏血酸。临用时配制。 7. 异戊醇：除生食物匀浆时产生的气泡 2-3滴/次 不要切得太8. 蒸馏水 1瓶/组 碎，以减少 Vc的流失五、实验步骤 和还原型Vc的氧化。 1. 蔬菜、水果: 样品采来后，整棵菜（不掰开）洗净吹干，均匀取样，稍切碎。称 取可食部分50.0 g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液(2 mol/L)捣成匀浆。 用烧杯称取10.0 g 匀浆(含0.2 g /kg以下抗坏血酸)于100m L棕色容量瓶 内，加5mL乙酸溶液(2mol/L)，用水稀释至刻度，混匀。滤纸过滤，滤液 备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液测定。 2 标准曲线的绘制 精密吸取0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.5, 2.0m L抗坏血酸标准使用液(相当于抗坏血酸0, 10.0, 20.0 ,40.0, 60.0, 80.0 ,100.0 ,150.0, 200.0µg)，分别置于10 mL比色管中。各加0.3 mL EDTA二钠溶液(0.25m ol/L),0.5 mL乙酸溶液(0.5mol/L),1.25mL固蓝盐B溶液(2g /L)，加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃ -25℃)下放置20 min后，移入1cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A，绘制标准曲线。 3 试样的侧定 精密吸取按1.0 mL样液(约相当于抗坏血酸200µg以下)于10mL比色管中，以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃ -25℃)下放置20 min后，移入1 cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A。从标准曲线上查出样液中抗坏血酸含量。 六、数据记录 管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 样液 A420 七、数据处理 C X = ——————— × 100 v1 m × —— × 1000 V2 式 中： X — 试样中抗坏血酸的含量， mg/100g； V1— 测定时所取溶液体积，mL； V2 — 试样处理液总体积， mL； M — 试样质量，g； C—试样测定液中抗坏血酸的含量，µg； 结果保留4位有效数字。