医学免疫学实验：噬细胞吞噬功能检测

一、实验目的

学习并掌握吞噬细胞吞噬功能检测。

二、实验原理

吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞噬细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞噬现象。通过计算吞噬百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞噬功能。

一、实验材料

1. ICR 品系小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供） 2. PBS 缓冲液

3. 3％硫代乙醇酸钠

4.羊红细胞（1％悬液，北京大学医学部实验动物中心提供） 5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管及载玻片 6. 瑞氏染液、甲醇

四、实验步骤

1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。 2. 四日后，注射羊红细胞（1％悬液）1ml 于小鼠腹腔内。

3. 注射1 小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。 4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。

5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。 6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30 分钟。取出涂片，用预温的PBS 冲洗3 次，然后用甲醇固定1 分钟，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后，滴于涂片上染色5-10 分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。

五、实验结果

观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。

也可用吞噬指数表示，即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。

六、讨论

1.充分揉搓腹腔，尽可能将吞噬细胞冲洗下来。

2.用尖吸管吸取腹腔液时，尽量避开腹腔脏器，避免损伤血管引起出血，影响实验结果。 3.用瑞氏染液染色时，切勿先将染液倾去后再冲洗，以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度。